目的:细胞外酸化在急性胰腺炎的发生发展过程中起着促进作用,然而,细胞外酸化是否可以激活胰腺腺泡细胞氯通道尚不清楚。本研究拟探讨细胞外酸化对大鼠胰腺腺泡AR42J细胞氯通道的影响以及其机制。方法:以大鼠胰腺腺泡AR42J细胞为实验对象,灌流不同pH的酸性灌流液(pH分别为7.1、6.8、6.2、5.6),用全细胞膜片钳技术记录酸敏感的氯电流。BCECF-AM荧光探针测定AR42J细胞内的pH值,实时荧光定量PCR(q PCR)技术检测细胞ClC氯通道家族各亚型的m RNA水平,免疫荧光法、Western blot法观察细胞氯通道蛋白ClC-3的表达,DCFH-DA荧光探针测定细胞内ROS水平。sh RNA技术沉默ClC-3氯通道的表达,并检测细胞活性氧与酸激活氯电流的变化,用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果:在对照组(灌流液pH 7.4)AR42J细胞可以观察到一个小而稳定的背景电流,4种不同pH的酸性溶液灌流均可激活AR42J细胞的氯电流,其中pH 6.8激活的氯电流最大,在+80m V时电流密度为58.05±6.62 p A/p F,-80m V时为-42.84±4.71p A/p F(P<0.01),该电流的翻转电位接近于氯离子的平衡电位理论值(-0.9m V)。该电流的离子选择性顺序为I~->Br~-≥Cl~->葡萄糖酸盐,氯通道阻断剂DIDS显著抑制该电流,在+80m V和-80m V时抑制率分别为76.99±2.08%和54.91±6.60%(P<0.01),对外向电流有较强的抑制作用(P<0.01)。氯通道阻断剂NPPB也能够抑制内向和外向电流,在+80m V和-80m V时的抑制率分别为109.19±2.59%和106.70±5.7%,内外向电流的抑制率没有显著差别(P>0.05)。细胞内的酸化不能诱导氯通道的开放。AR42J细胞表达ClC家族中ClC1～7基因的m RNA,其中ClC-3的m RNA表达最多。氯通道蛋白ClC-3分布在AR42J细胞的细胞膜、细胞浆和细胞核。ClC-3sh RNA显著下调AR42J细胞ClC-3蛋白的表达(P<0.01),同时酸激活的氯电流明显减弱(P<0.01),提示ClC-3是酸激活氯通道的重要分子基础。细胞外酸化(pH 6.8)显著提高细胞内活性氧(ROS)的水平,酸性溶液刺激30min活性氧水平上升76.11±0.75%(P<0.01)。ROS清除剂L-NAC显著抑制酸诱导的ROS生成,抑制率为95.49±2.49%(P<0.01),同时,酸激活的氯电流被完全抑制。另一方面,ROS水平不受ClC-3表达沉默的影响,提示ROS是酸激活氯电流的重要影响因素,ROS的产生在酸激活的氯电流中起到上游信号的作用。结论:(1)细胞外酸化能激活大鼠胰腺腺泡AR42J细胞氯电流。(2)ClC-3氯通道蛋白是AR42J细胞外酸化激活氯电流的主要分子基础。(3)细胞外酸化通过诱导胞内ROS的增加而激活ClC-3氯通道产生氯电流。