佛手精油的高效萃取、抗氧化活性评价及脂质体制备工艺的研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zuomingyu6
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佛手为芸香科柑橘属植物,具有祛痰、止咳、平喘的功效,还具有抗炎、抗菌、抗氧化、降血压、抗肿瘤、抗抑郁等多种药理作用。佛手精油是佛手主要药理活性成分之一,但是目前佛手精油提取技术仍然存在提取率低、物质提取不充分、设备成本高等问题,有待对其提取技术加以优化;此外,佛手精油易挥发、易氧化、水溶性差等缺陷限制其应用。基于此,本课题以低温连续相变萃取技术萃取佛手精油,并对其萃取工艺进行优化;对提取的佛手精油进行体内、体外抗氧化活性评价;制备佛手精油脂质体,并对佛手精油脂质体进行表征,对脂质体稳定性进行研究。主要研究内容和结果如下:(1)佛手精油的高效萃取工艺研究。采用低温连续相变技术萃取,主要研究了佛手精油的萃取工艺,以佛手精油得率和药理成分含量为指标,评价萃取工艺的效果。研究表明,低温连续相变技术萃取佛手精油最佳工艺条件为:萃取温度为50.4℃,萃取压力为0.62 MPa,萃取时间61 min,在此条件下佛手精油的得率为8.29‰,精油有效成分相对百分含量为85.24%。(2)佛手精油的体外抗氧化活性评价。采用DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力、羟基自由基清除能力、总还原力、抑制脂质过氧化能力和β-胡萝卜素漂白法六种方法对佛手精油的体外抗氧化活性进行评价。结果表明,佛手精油清除DPPH自由基的IC50值为0.94 mg/m L,Vc IC50值为0.014 mg/m L,VEIC50值为0.03 mg/m L;佛手精油清除ABTS自由基的IC50值为0.056 mg/m L,VEIC50值为0.032 mg/m L;清除羟基自由基的IC50值分别为:VC为1.68×10-5 mg/m L、佛手精油为1.93×10-5 mg/m L、VE为3.67×10-5 mg/m L;佛手精油的总还原力总体上弱于VC、VE,浓度达到4 mg/m L总还原力与VC相当(p>0.05);佛手精油对脂质过氧化的抑制效果不及同浓度的VE,但强于VC,浓度为4.0 mg/m L时抑制率为85.27%;佛手精油1.0 mg/m L时对β-胡萝卜素漂白的抑制率为31.63%,显著低于此浓度下VE的71.52%(p<0.05),当精油浓度达到3 mg/m L时抑制率为72.87%。(3)佛手精油的体内抗氧化活性评价。以秀丽隐杆线虫为研究对象,通过测定线虫的寿命、相关生理指标和抗氧化指标对佛手精油的抗氧化活性进行研究;测定线虫在热应激、百草枯诱导的氧化应激条件下的存活率和生存情况。结果表明,与空白对照相比,佛手精油在浓度为20μg/m L、50μg/m L、100μg/m L时对线虫的寿命延长率分别为31.70%,22.54%,11.85%;佛手精油对线虫的产卵量及头部摆动频率无显著性影响(p<0.05);在第10 d、16 d,20μg/m L、50μg/m L佛手精油能够明显提高线虫的运动能力和移动力,延缓线虫的肌肉衰老速度(p<0.05);20μg/m L、50μg/m L、100μg/m L佛手精油对线虫体内ROS积累量具有显著的清除效果(p<0.05),分别降低了24.99%、16.81%、14.61%;20μg/m L、50μg/m L、100μg/m L佛手精油显著提高线虫体内的SOD酶活力(p<0.05),分别提高了89.12%,59.03%,14.53%;20μg/m L、50μg/m L佛手精油分别提高了CAT酶活力124.59%、82.92%(p<0.05);20μg/m L、50μg/m L、100μg/m L佛手精油样品组线虫体内MDA含量分别降低了58.57%、45.71%、34.29%(p<0.05);20μg/m L、50μg/m L、100μg/m L佛手精油样品组线虫体内MDA含量分别降低了58.57%、45.71%、34.29%(p<0.05);在热应激条件下,20μg/m L、50μg/m L、100μg/m L佛手精油样品组的线虫存活率分别提高了25.40%,32.54%,8.73%(p<0.05);在氧化应激条件下,20μg/m L、50μg/m L、100μg/m L佛手精油样品组的线虫生存时间分别延长了21.33%、25.33%、36.0%(p<0.05)。(4)佛手精油脂质体制备工艺及稳定性研究。研究了均质压力、均质次数、磷脂/胆固醇比例、精油添加量、水化时间对脂质体粒径、Zeta电位、PDI多分散指数以及包封率的影响,并对最佳工艺条件下制备的佛手精油脂质体进行微观形貌观察、离心稳定性、贮藏稳定性研究。结果表明,最佳制备工艺为:均质压力120 MPa、均质次数5次、磷脂/胆固醇比例5:1、精油添加量3.5 mg/m L、水化时间75 min,在此条件下制备的脂质体粒径为183.53±2.39 nm,PDI多分散指数为0.147±0.032,Zeta电位值为38.75±0.93 m V,包封率为47.23±0.54%;透射电子显微镜观察脂质体为不规则球形,能够明显看到双分子层结构;在10000 rpm/min条件下分别离心2 min、5 min无分层现象;在4℃下贮藏30 d后,粒径由183.53±2.39 nm增大到223.57±1.34 nm,增大21.8%,Zeta电位由38.75±0.932m V下降到28.36±1.027 m V,精油保留率为85.03%。
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