万古霉素是目前临床上用于治疗由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MASA)引起的严重感染疾病的首选药物。但20世纪80年代报道发现对万古霉素耐药的肠球菌以来,其耐药菌的出现呈增长趋势,基于这种状况,开发治疗耐药菌感染的新型糖肽类抗生素势在必行。利用基因工程技术对其生物合成途径进行改造,或是利用其中的功能基因体外表达催化合成新的杂合糖肽类抗生素,是目前研究的一个热点。本论文运用PCR-targeting的方法对东方拟无枝酸菌万古霉素非核糖体多肽合成酶基因进行改造并对获得的突变株发酵产物进行研究,内容包括:阻断万古霉素非核糖体多肽合成酶基因vcm4。通过PCR-targeting的方法对万古霉素产生菌Amycolatopsis orientalis HCCB10007中vcm4基因进行阻断,将安普霉素抗性基因盒替换vcm4基因内部500 bp片段,使其不能正常表达万古霉素非核糖体多肽合成酶Vcp3,进而阻断万古霉素的生物合成。通过对突变株染色体PCR验证和目的序列测序检验以及突变菌株发酵,证实安普霉素抗性基因盒替换预期序列。对阻断突变株A.orientalis dA9的发酵产物进行的检测表明,该菌株不合成糖肽类抗生素,但首次发现其能产生非万古霉素类的抗菌活性物质。对A.orientalis dA9产生的抗菌活性物质进行了研究,通过浸提、反相TLC、HPLC等检测发现抗菌活性源自HPLC出峰时间接近的两个物质LYV2007lw1和LYV2007lw2。通过中压层析进行了产物纯化,经质谱和核磁测定确证了结构,证实LYV2007lw1为文献报道的产物ECO-0501,LYV2007lw2为其去甲基衍生物。与出发株相比,突变菌株产生LYV2007lw1和LYV2007lw2的量比出发菌株提高了8倍和35倍。对阻断突变株A.orientalis dA9的培养条件包括接种时间、发酵培养基、最适初始pH、最适培养温度、接种量、溶氧等进行了考察,获得了优化的发酵条件;优化条件下,A.orientalis dA9产生LYV2007lw1及LYV2007lw2总量比文献报道的条件分别提高了33%和31%。