【摘 要】
：
目的:探究环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂依托度酸以及β2肾上腺素能受体（β2-adrenergic receptor,β2-AR）阻滞剂ICI118,551联合应用对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）体外及体内的侵袭转移的协同抑制作用。方法:查询TCGA数据库COX-2在头颈鳞癌（head and neck ce
【基金项目】
：
项目名称:β肾上腺素能受体介导的信号通路对口腔鳞癌细胞的调控及其分子机制研究,项目合同编号:81460413,项目来源:国家自然科学基金,项目起止时间:2015年1月—2018年12月
论文部分内容阅读
目的:探究环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）抑制剂依托度酸以及β2肾上腺素能受体（β2-adrenergic receptor,β2-AR）阻滞剂ICI118,551联合应用对口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）体外及体内的侵袭转移的协同抑制作用。方法:查询TCGA数据库COX-2在头颈鳞癌（head and neck cell carcinoma,HNSCC）中的表达并收集口腔鳞状细胞癌组织30例以及正常口腔粘膜上皮15例,通过免疫组化实验方法检测口腔鳞癌组织中COX-2相对于正常的口腔粘膜上皮组织是否高表达;选取两种口腔鳞癌细胞系（Cal27及SCC9）以及本课题组前期实验中所培养出的原代口腔鳞癌细胞,利用细胞划痕及transwell侵袭实验检测梯度浓度改变（0μmol/L、0.1μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L、7.5μmol/L、10μmol/L）的依托度酸对三种口腔鳞癌细胞的迁移侵袭的影响,同时检测空白对照组和经依托度酸（5μmol/L）或ICI118,551（5μmol/L）单独处理以及两种药物联合作用后的三种口腔鳞癌细胞的迁移及侵袭能力的变化。利用RT-qPCR检测三种口腔鳞癌细胞经上述四种处理方法处理后EGFR、TGF-β1、IL-1β以及与肿瘤发生发展相关的VEGF-A、MMP2的mRNA的表达变化;利用ELISA检测经药物处理后IL-1β的蛋白表达变化以及利用Western Blot检测EGFR、TGF-β1、VEGF-A及MMP2的蛋白表达水平变化。选用Cal27细胞系于6-8周龄雌性Balb/c裸鼠（n=24）的舌部构建口腔鳞癌原位移植瘤动物模型。将24只Balb/c裸鼠随机分为空白对照组、ICI118,551处理组、依托度酸处理组以及联合用药组,每组6只行药物灌胃处理。观察四组间裸鼠生存时间和瘤体大小的差异以及下颌下淋巴结是否出现转移,待小鼠死亡时行舌部瘤体以及颌下淋巴结取材,取出部分瘤体组织及颌下淋巴结组织通过苏木精-伊红染色法（HE染色法）确定舌部瘤体组织是否为鳞状细胞癌并观察各组的颌下淋巴结组织是否存在转移情况。通过免疫组化、RT-qPCR检测舌部瘤体组织EGFR、TGF-β1、IL-1β、VEGF-A及MMP2的表达差异。Western blot检测舌部瘤体组织中EGFR、TGF-β1、VEGF-A及MMP2蛋白的表达差异。取四组小鼠血清利用ELISA检测各组荷瘤鼠血清中IL-1β的浓度差异。结果:TCGA数据库结果显示COX-2在头颈鳞癌组织的表达显著高于正常组织。且免疫组化结果显示COX-2在口腔鳞癌组织中的表达显著高于正常的口腔粘膜上皮组织,结合本课题组前期的实验结果可得β2-AR和COX-2均在口腔鳞癌组织中的表达显著高于正常口腔粘膜上皮组织。划痕和transwell侵袭实验的结果显示随着依托度酸药物浓度的增加,三种口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭能力不断下降;同时在与联合用药组比较时结果显示ICI118,551和依托度酸单独作用细胞时均能抑制口腔鳞癌细胞的迁移及侵袭的能力,并且当两种药物联合应用处理细胞时其抑制效果更强。利用RT-qPCR检测上述因子的mRNA的表达变化发现在Cal27,SCC9细胞系及原代口腔鳞癌细胞中经联合用药处理后EGFR,TGF-β1,IL-1β,MMP2均出现了明显的下调,且下调程度明显于ICI118,551或（和）依托度酸单独作用;而VEGF-A只有在原代口腔鳞癌细胞中有明显的下调,在其他两个口腔鳞癌细胞系中均未有明显的下调。Western blot结果显示三种口腔鳞癌细胞经两种药物联合作用后EGFR、TGF-β1、MMP2均出现了明显的下调,与RT-qPCR的结果一致。ELISA结果显示IL-1β也出现了明显下调。在体内实验中四组Balb/c裸鼠的舌部均能成功成瘤,结果显示ICI118,551或依托度酸单独用药可以一定程度下抑制瘤体的生长,而两种药物联合用药能更加明显地抑制瘤体的生长。从细胞悬液注射入Balb/c裸鼠舌部之日起计算各组生存时间,结果显示较其他三组而言联合用药组能明显延长裸鼠的生存期。通过对四组小鼠的颌下腺及淋巴组织取材并行HE染色显示,联合用药组未发现下颌下淋巴结转移的情况。将舌部瘤体取材后行免疫组化结果显示及Western blot检测上述基因均有明显的下调。ELISA检测结果显示联合用药组血清中IL-1β浓度明显降低。结论:β2-AR阻滞剂ICI118,551和COX-2抑制剂依托度酸联合作用较单独用药而言能更明显抑制口腔鳞癌的侵袭转移并能延长口腔鳞癌原位移植瘤Balb/c裸鼠的生存期。两药联合应用能明显下调与口腔鳞癌侵袭转移及肿瘤生长、血管形成相关的因子,其中以EGFR的表达变化最为明显。两药的联合应用有望成为临床上治疗口腔鳞癌的潜在辅助药物治疗方法。
其他文献
目的:探讨超声、血小板/脾脏体积比（platelet spleen volume ratio,PSVR）、实验室指标及内镜检查对肝硬化食管静脉曲张破裂出血（esophageal variceal bleeding,EVB）的预测价值,为临床防治EVB提供参考依据。方法:收集2018年1月至2019年12月广西医科大学第一附属医院消化内科收治的90例肝硬化食管静脉曲张患者的临床资料,根据入院时是否合
目的:探讨右美托咪定复合布托啡诺对全身麻醉围拔管期应激反应的影响。方法:选择78例择期在全身麻醉在行乳腺癌或甲状腺癌手术患者,根据随机数字法,共分为4组:A组（对照组）16例,术毕静注生理盐水;B组（右美托咪定组）22例,术毕泵注盐酸右美托咪定（0.2μg·kg-1·h-1）,直至拔出气管导管;C组（布托啡诺组）19例,术毕静注酒石酸布托啡诺（20ug·kg-1）;D组（右美托咪定复合布托啡诺组）
目的:探讨我院早产儿视网膜病变（retinopathy of prematuriy,ROP）的发病特点及发病的相关高危因素,为提高临床医师对制定ROP的防治水平提供理论依据。方法:回顾性分析2016年1月1日至2019年3月31日广西医科大学第一附属医院新生儿科的符合眼底筛查标准患儿的早产儿资料,将可能发生ROP的相关危险因素进行单因素分析和logistic回归分析探讨ROP的危险因素。采用IBM
目的:甲状腺激素其主要作用是促进机体新陈代谢,维持机体的正常生长发育。通过对长寿地区长寿老人及南宁市体检老年人血清甲状腺激素水平测定,相互对比其中差异。探究巴马长寿地区长寿老人甲状腺激素水平以及对长寿的影响。对象与方法:根据1982年WTO对老年定义,选取巴马长寿地区年龄90岁以上老人作为老年长寿组,选取南宁地区老年人作为对照组。所有受试者均采集人口学资料、问卷调查其心理、社会适应性状况及生活习惯
目的:目前关于超声支气管超声影像和（或）其他影像诊断手段对纵隔淋巴结良恶性的诊断价值尚不明确,因此本研究对纵隔淋巴结的EBUSTBNA的超声影像特征及胸部计算机断层扫描的影像特征进行回顾性分析,判断纵隔淋巴结的良恶性,并探究EBUS-TBNA对纵隔淋巴结的诊断价值。方法:回顾分析2016年02月至2019年06月在广西医科大学附属肿瘤医院内镜诊断中心进行的EBUS-TBNA的患者,对患者的年龄、性
目的:本研究旨在建立临床前研究的药物性肝损伤模型,在临床前期研究水平评价老鼠簕生物碱A（HBOA）对药物性肝损伤的作用效果,为老鼠簕生物碱A的进一步开发和利用提供实验依据。方法:随机分60只雄性昆明小鼠为正常组、APAP组（对乙酰氨基酚300mg/kg）、HBOA高、中、低剂量组（200、100、50 mg/kg）和阳性组（联苯双酯150 mg/kg）。灌胃给予HBOA高、中、低剂量组和阳性组相对
目的:目前,临床上关于鼻中隔偏曲的研究主要在于鼻中隔偏曲的手术方法以及鼻中隔偏曲与慢性鼻窦炎之间的关系,少有文章涉及鼻中隔偏曲与相邻结构的关系探讨,本研究在于测量鼻中隔偏曲组与非鼻中隔偏曲患者的鼻腔高度,并进行两者间的比较,评估成人患者鼻中隔偏曲与鼻腔高度两者之间的关系,并讨论鼻中隔偏曲与硬腭水平和上颌窦底水平相对位置的关系,同时探讨鼻中隔偏曲的程度与鼻腔高度的关系。方法:收集2018年4月至20
研究背景:在成熟的骨骼中,骨再造取代老化和受损的骨。提供钙和磷的来源,保持骨骼健康。为了适应增长和机械荷载的变化,骨组织不断进行自我重塑,以此来保持矿物盐代谢平衡和调节骨髓微环境。骨组织的自我重塑状态异常会导致骨骼系统稳态失调性疾病,比如佩吉特病,关节置换导致的假体周围松动,老年性骨质疏松症等,而破骨细胞功能紊乱是导致骨质疏松的主要原因。因此,调节破骨细胞的分化和功能是针对骨质疏松症的治疗策略之一
背景与目的:中性粒细胞在肿瘤发病机理中的作用一直是研究的热点,其在肿瘤中所表现的功能并不相同。但是,引起中性粒细胞发挥促瘤或抗瘤作用的机制仍不明确。在本研究中,我们发现TGF-β1和IL-17A在口腔鳞癌组织内高表达及中性粒细胞的大量浸润。因此,本实验将探讨TGF-β1和IL-17A对口腔鳞癌内中性粒细胞的表型影响,并探究极化的中性粒细胞对口腔鳞癌细胞的调控机制。方法:运用免疫荧光染色法观察口腔鳞
目的:探讨重症监护病房（Intensive care unit,ICU）血流感染性脓毒症患者并发急性肾损伤（Acute Kidney Injure,AKI）时其病原学的类型以及预后的关系,为脓毒症并发AKI的治疗及预后评估提供参考。方法:回顾性分析2017年10月1日至2019年2月28日收入广西医科大学第一附属医院重症监护病房169例血流感染性脓毒症患者的临床资料,经过纳入标准和排除标准的筛选,