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家蚕因具有世代周期短、繁殖率高、遗传背景清楚，后代个体数量多、能大规模饲养等优点而成为经典遗传学研究的模式生物之一。家蚕转基因技术可以获得新品种、生产外源蛋白，存在着巨大的发展潜力和很高的利用价值。它包括基于转座子载体的家蚕转基因以及基于非转座子载体的家蚕转基因。本研究主要探讨非转座子载体介导家蚕转基因的可能性。人胰岛素样生长因子I(human insulin-like growth factor-I，hIGF-I)是一种多功能细胞增殖调控因子，在活体内外hIGF-I能促进多种细胞的生长和分化,是生长激素功能的主要辅助调节因子,并且具有类似胰岛素的降血糖活性，在医学领域具有广阔的应用前景。由于成熟hIGF-I在人血内含量不高，且提纯技术难度大。缺少hIGF-I纯制品已成为对其进行研究与应用的主要障碍。家蚕作为一种高效真核表达系统，在生产基因工程药物方面有很好的应用前景。同时，为了进一步探讨非转座子载体pIZT/V5-His介导转基因家蚕表达外源基因的可能性，我们将人胰岛素样生长因子I（hIGF-I）基因克隆进pIZT/V5-His载体中，构建了转基因载体pIZT/V5-His-hIGF-I，并利用精子介导法将其导入家蚕，通过绿色荧光筛选并结合PCR、Dot blotting等分子鉴定，证实成功获得了转基因家蚕，并将其培育至G2代；Western blotting分析结果显示转基因家蚕表达的重组hIGF-I的分子量约为12.5kD，ELISA检测结果显示，hIGF-I在G2代转基因蚕、后部丝腺、脂肪组织冻干粉中的表达水平分别为65、411和469ng/g。证实通过非转座子载体介导可以将外源基因导入家蚕基因组，并实现外源基因的表达。此外，为了研究基于基因打靶载体的家蚕转基因，我们以家蚕ovo基因上下游各1.2kb内含子区域片段作为同源臂，将a3启动子驱动绿色荧光蛋白(gfp)基因的表达盒，以及ie-1启动子驱动新霉素(neo)抗性基因的表达盒克隆进二同源臂之间，作为正向选择基因；并将ie-1启动子驱动红色荧光蛋白(DsRed)基因的表达盒连接在右侧同源臂外部，作为负向选择基因，构建了基因打靶载体pSK-ovoL-A3-GFP-IE-neo-ovoR-IE-DsRed，并通过精子介导法将该打靶载体导入家蚕卵，通过G418筛选、绿色荧光筛选并结合PCR等分子鉴定，证实获得了转基因家蚕，进一步对外源基因的插入位点进行鉴定，判断获得的转基因家蚕为基于基因打靶载体的非同源重组的随机整合的转基因家蚕，同时表明同源重组的效率仍然很低。