论文部分内容阅读
本文主要从以下几部分进行论述： 第一部分 CPT-Ⅱ基因位点的多态性与病毒性脑炎的相关性研究 目的：研究CPT-Ⅱ基因rs2229291和rs1799821位点的多态性，探讨CPT-Ⅱ基因的多态性与病毒性脑炎发病的关系。 方法：于2011年10月至2013年11月收集山东青岛地区无血缘关系的440个病毒性脑炎儿童，记录患儿的症状、体征、临床特点、实验室检测指标，根据病情轻重分成轻度、重度。同时收集同时期同地区229例儿童志愿者（均有过流感感染病毒史而无脑炎病史，年龄分布于2-8岁，男112例，女117例），分别提取患儿及健康儿童外周血白细胞的基因组DNA,通过改良的多重连接酶检测反应iMLDR?基因分型技术检测CPT-Ⅱ基因rs2229291和rs1799821位点的多态性序列，同时在患儿高热和恢复期测定CPT-Ⅱ活性和ATP浓度。 结果：1、rs2229291T/G基因位点TT，TG和GG基因型的比例在对照组和患病组分别为65.1％，28.4%和6.5%;54.5%，37.7%和7.8%，rs1799821G/A基因型AA，AG和GG基因型在对照组和患病组分别为47.6%，41.0%和11.4%；55.0%，39.3%和5.7%，在患病组和对照组之间二者均有明显的统计学差异。 2、患病组rs2229291的TG+GG基因型分布频率明显的高于对照组(p=0.009和Bonferroni校正)，而在患病组和对照组之间，rs1799821的GG基因型分布频率明显降低（P=0.005和Bonferr oni校正）。分别采用TT和AA基因型为参照，发现TG(rs2229291)和GG基因型(rs1799821)的分布频率和病毒性脑炎的发病风险密切的相关（OR=1.346或=2.309，分别；P=0.010和P=0.005和Bonferroni校正）。 3、rs1799821位点G等位基因的分布频率和病毒性脑炎之间有密切相关性，有统计学意义（P=0.011，或=1.379，95%可信区间：1.075-1.767，Bonferroni调整后）。患病组和对照组之间同时存在rs2229291和rs1799821杂合子基因型分布频率无统计学意义(P=0.697)。 4、患病组CPT-Ⅱ基因的rs2229291位点的TG+GG基因型分布的频率与抽搐发作时的温度(≤39℃)，病情的程度（程度；P=0.018和P=0.023和Bonferroni校正）有密切相关性，rs1799821位点的各个基因型和这些临床特征之间无显著性的关联。 5、患病组rs2229291位点的TG+GG基因型的CPT-Ⅱ活性在41℃（相比较于35℃和37℃时的CPT-Ⅱ活性）显著降低（平均35±18.3%，P=0.001）。患病组(n=198)rs1799821位点的各个基因型的CPT-Ⅱ活性在41℃温育120分钟，相比35℃没有明显降低（平均10±5.9%，P=0.13）。 6、患病组的CPT-Ⅱrs2229291T/G位点的TG+GG基因型的ATP水平在脑炎患儿高热时显著降低(0.63±0.21mmol/L，N=200)，相比与那些在恢复期患者(1.21± 0.32mmol/L，N=200，P=0.003)，和无CPT-Ⅱ基因rs2229291T/G位点多态性的患者(0.95±0.27mmol/L，n=150，P=0.009)。 结论：1.CPT-Ⅱ基因rs2229291等位基因G携带者易感。 2.CPT-Ⅱrs2229291位点的基因多态性可能是病毒性脑炎感染的易感因素之一。 3.ATP生成减少可能导致CPT-Ⅱ基因rs2229291等位基因G携带者易感。 第二部分 CCL2-2510的基因多态性与EV71脑炎的相关性研究 目的：探讨CCL2-2510A/G位点的基因多态性与EV71感染的相关性。 方法：本研究对象EV71感染患儿，实验组为36例EV71脑炎患儿，对照组为141例EV71感染无病毒性脑炎临床表现的患儿。用限制性片段长度多态性－聚合酶链反应(PCR-RFLP)进行基因多态性的分析，测序文件用Polyphred软件分析，并结合人工校对记录后整理出结果，结合分析临床资料。 结果：1、EV71脑炎组CCL2-2510GG基因型的分布频率明显高于对照组（66.7%vs.41.8%，P=0.028）。EV71脑炎组CCL2-2510G等位基因的分布频率也显著高于对照组（79.2%vs.64.9%，OR＝2.1，95%CI=1.1-3.8,P=0.023）。 2、EV71感染无脑炎组AA，AG和GG基因型在性别，年龄和发热持续时间，C反应蛋白（CRP）水平，白细胞（WBC）计数，血糖（BG）不同基因型均显著不同，（P<0.001，P<0.001，P=0.002）。丙氨酸转移酶（ALT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST），或肌酸激酶同工酶（CK-MB）在不同的基因型之间没有明显的统计学意义。 3、EV71脑炎组中脑脊液的葡萄糖，氯化物，蛋白，白细胞计数（除单核细胞）和淋巴细胞在不同基因型中也没有明显的改变。CCL-2510位点G等位基因与EV71脑炎密切相关。 结论：1.CCL2-2510位点的不同基因型可能在EV71感染中致病影响不同。 2.CCL2—2510G等位基因与EV71脑炎密切相关。