海南无乳链球菌分子血清型、MLST分型鉴定以及LAMP检测技术的建立

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无乳链球菌对人/鱼/牛均可感染,造成新生儿脑膜炎、肺炎和败血症等、导致奶牛乳房炎而泌乳量下降甚至停乳、引起野生鱼类和经济鱼类、尤其是罗非鱼的大量死亡,危害严重。为探究该菌在海南女性、罗非鱼和奶牛中的分布情况,建立该菌的快速有效的现场检测方法,本论文从海南罗非鱼养殖场、海南大学东坡湖、澄迈奶牛养殖场和海南大学校医院,采集了鱼源、牛源和人源样本,并对其进行了研究。本论文通过对采集样本分离、纯化和鉴定,共分离了 191株菌,确定了 18株无乳链球菌致病菌,其中4株来自女性携带者,14株来自患病罗非鱼,奶牛没有发现无乳链球菌。为确定海南无乳链球菌血清型分布情况,首先对18株病原菌进行了血清型鉴定,结果发现了两种分子血清型,感染罗非鱼的是唯一血清型Ⅰa型,感染人的是Ⅰa型和Ⅲ型。以上两种血清型都为主要致病性无乳链球菌血清型,其中Ⅰa型无乳链球菌是我国罗非鱼感染的唯一血清型,Ⅲ型为人源致病性最强无乳链球菌血清型。其次对18株无乳链球菌进行了 MLST分型实验,比较探究了该病原菌的亲缘关系和相互之间存在的联系。研究结果表明,鱼源和人源无乳链球菌存在着分型和进化上的隔离,其中发现5种ST分型,鱼源是单一的ST7型无乳链球菌,人源发现四种不同的ST分型。根据eBURST分析并没有发现鱼和人有交叉感染的情况。最后针对无乳链球菌建立了一种快速高效检测无乳链球菌的方法,由肉眼可以鉴定并获得准确的结果在实际生产应用中极为高效和方便。无乳链球菌LAMP快速检测技术的建立,为该病原菌的有效防控提供了关键的技术支持。本次研究初步探究了海南部分地区无乳链球菌的血清型分布和MLST型的相互关系,同时建立了简便高效的鉴定技术为海南省无乳链球菌的病害防治打下了的基础,对后续进一步的研究具有重要意义。
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