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小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)所致绵羊和山羊及野生小反刍兽等动物的小反刍兽疫(peste des petits ruminants,PPR),是一种急性和高度接触性传染病,病死率高,给养羊业造成巨大经济损失。因此开展该病原的相关研究,对PPR疫情的监测和防控具有重要意义。由于目前的诊断方法很难有效的区分疫苗接种与自然感染者。融合蛋白(fusion protein,F)分布于病毒的囊膜表面,促进囊膜与宿主细胞膜融合,和病毒的入侵与黏附作用密切相关。而目前针对F蛋白诊断方法的建立仅限于疫苗株,而在新发野毒株中较少。基于此,开展了如下研究工作:(1)为研究小反刍兽疫病毒甘肃(PPRV GS)分离株基因序列特征及其遗传进化关系,参照GenBank中PPRV Nigeria 75/1株F基因序列(登录号:HQ197753)设计引物,应用RT-PCR扩增GS株F基因,完成基因测序及序列分析。结果表明:GS株F基因(登录号:KX822738)完整CDS全长1 641 bp,编码546个氨基酸,是一种跨膜蛋白,具有信号肽;PPRV GS株F基因与2013年中国XJYL株的(登录号:KM091959.1)核苷酸同源性最高,达到99.0%;而与Nigeria75/1株核苷酸同源性仅为93.0%;F基因的系统进化树显示,PPRV GS株与亚洲26个毒株和非洲西北部摩洛哥2个毒株同属谱系Ⅳ。(2)为研究GS株F蛋白的免疫原性,设计引物扩增去信号肽和跨膜区的F基因片段Fa并将其亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-PPRV-Fa转化大肠杆菌(Escherichia coli)Transetta(DE3)后经IPTG诱导表达,纯化表达产物免疫新西兰兔制备多克隆抗体,进而应用间接ELISA和Western-blot对重组蛋白免疫原性进行分析。结果表明:去信号肽和跨膜区的F基因片段Fa在大肠杆菌中成功获得表达,重组蛋白大小约为59 kDa,且主要以包涵体形式存在;间接ELISA和Western-blot结果显示,纯化产物免疫原性良好。(3)以纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤细胞技术,与SP2/0细胞融合,间接ELISA检测能分泌预定抗体的阳性杂交瘤细胞,并对其进行亚克隆筛选,制备腹水,同时对单克隆进行效价和反应特异性的检测。结果表明,筛选的2株单克隆抗体4G9、5E3,抗体亚型均为IgG2b,轻链为κ,腹水效价为1:51 200;Western-blot检测显示制备的单克隆抗体能与重组蛋白发生特异性反应。本研究结果为小反刍兽疫病毒F蛋白的相关功能研究奠定了基础,为小反刍兽疫的快速诊断方法的建立提供了试验数据。