泡沫病毒（Foamy virus,FV）属于逆转录病毒科（Retroviridae）泡沫病毒亚科（Spumaretrovinae）,是泡沫病毒属（Spumavirus）的唯一成员。因其感染体外培养的细胞后诱导产生类似泡沫的巨细胞,又名syncytia而得名。泡沫病毒能感染多种属多类型的细胞,无明显致病性,基因装载容量大,能整合进细胞基因组实现基因的稳定表达。这些特点使它成为基因治疗载体的研究热点。作为一个基因治疗的候选载体,建立泡沫病毒滴度的检测方法非常必要。本论文建立了多种检测方法,通过比较分析,希望得到一种确定原型泡沫病毒滴度的有效方法。空斑形成试验方法是一种检测及定量病毒滴度的常用方法,该方法适用于烈性病毒,所测定的滴度单位为空斑形成单位（Plaque Forming Unit,PFU）。在本文中我们尝试了测定原型泡沫病毒PFU的空斑形成试验,但是没有观测到空斑。可能原因是原型泡沫病毒感染HT1080细胞后主要形成了合胞体。但由于合胞体比正常细胞染色深,我们观测到明显蓝斑,因此该方法也可以用于定量原型泡沫病毒。所有的逆转录病毒都能表达逆转录酶（ReverseTranscriptase）。逆转录酶的活性水平的高低可以间接反映病毒粒子的数量。介于这一特点,本论文建立了基于SYBR Green Ⅰ的产物增强逆转录酶活检测法（SYBR Green Ⅰ Product Enhanced Reverse Transcriptase,SG-PERT）定量原型泡沫病毒（Prototype foamy virus）。该方法具有灵敏度高、节省时间、操作简单等优点。逆转录酶根据其二价阳离子的偏好型可分为两类,一类依赖于Mg²⁺,另一类依赖于Mn²⁺。在SG-PERT方法的基础上,探究了原型泡沫病毒对二价阳离子的偏好性及其最适浓度。泡沫病毒的基因组为线性RNA分子的二聚体,通过定量泡沫病毒的核酸也可精确定量其滴度。在本文中,建立了基于实时定量PCR技术的定量原型泡沫病毒滴度的方法,并且在此基础上探究了原型泡沫病毒中RNA型病毒和DNA型病毒的比例、全长型病毒和缺失型病毒的比例。泡沫病毒的5’LTR启动子能特异性的被自身表达的Tas/Bel1激活,启动下游基因的表达。在本文中,建立了基于LTR活性检测的原型泡沫病毒滴度定量方法。将荧光素酶报告基因和绿色荧光蛋白报告基因分别克隆在5’LTR启动子下游构建了重组质粒 pGL4.17-5’LTR-Luc 和 pAc-5’LTR-EGFP,转染 BHK-21 细胞后用 G418分别筛选两个月后得到稳定指示细胞系LTR-Luc和LTR-EGFP。用原型泡沫病毒分别感染指示细胞系,由于荧光素酶报告基因和绿色荧光蛋白报告基因的表达量与泡沫病毒的滴度成正相关,即可通过检测指示细胞系的化学发光强度或绿色荧光表达量定量有感染力的病毒的滴度。本论文取得的成果如下:（1）建立了测定原型泡沫病毒空斑形成单位的方法。（2）建立了 SG-PERT方法,R²为0.99,扩增效率为103%,检测下限为103pU,相当于一个病毒粒子,灵敏度较高、可重复性较好、准确度较高。确定了原型泡沫病毒的逆转录酶依赖于Mn²⁺,并且在1 mM浓度下活性最高。（3）建立了实时定量PCR定量原型泡沫病毒核酸的方法,该方法检测下线为10-100个病毒粒子;确定了 RNA型病毒和DNA型病毒的比例以及全长型病毒和缺失型病毒的比例分别为4.31:1和3.18:1。（4）建立了指示细胞系LTR-Luc,通过荧光素酶检测系统可灵敏的定量病毒。（5）建立了指示细胞系LTR-EGFP,通过流式细胞术可快速准确的定量病毒。