【摘 要】
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本论文对落叶松尺蠖核型多角体病毒（Eran NPV）基因组及落叶松尺蠖核型多角体LAMP检测方法、落叶松尺蠖线粒体基因组进行初步探究。通过生物测定,制作超薄切片,在扫描电镜下观察病毒的外部形态特征。根据高通量测序测得落叶松尺蠖核型多角体病毒的基因组。根据落叶松尺蠖核型多角体病毒的F蛋白基因设计特异性LAMP引物,成功建立了落叶松尺蠖核型多角体病毒的LAMP检测技术体系。经高通量测序手段测出基本完全
【基金项目】
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曲良建副研究员主持的研究项目:塞罕坝机械林场重大害虫防治（NO.CAFYBB2018ZB005）
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本论文对落叶松尺蠖核型多角体病毒（Eran NPV）基因组及落叶松尺蠖核型多角体LAMP检测方法、落叶松尺蠖线粒体基因组进行初步探究。通过生物测定,制作超薄切片,在扫描电镜下观察病毒的外部形态特征。根据高通量测序测得落叶松尺蠖核型多角体病毒的基因组。根据落叶松尺蠖核型多角体病毒的F蛋白基因设计特异性LAMP引物,成功建立了落叶松尺蠖核型多角体病毒的LAMP检测技术体系。经高通量测序手段测出基本完全的落叶松尺蠖线粒体基因组,并了解其进化关系。研究内容与结果如下:（1）对落叶松尺蠖进行观察扫描电镜、超薄切片照片,发现该病毒为单粒包埋核型多角体病毒,大多近似三角形少数呈四角形或近圆形,表面光滑。多角体的直径为0.6-1.8μm。病毒粒子单个存在。（2）落叶松尺蠖病毒测得基因组长124294bp,136个蛋白质编码基因,G+C含量33.17%。最长的基因是第14个基因共编码了1995个氨基酸,最短的基因是第43位基因共编码了294个氨基酸。（3）以落叶松尺蠖核型多角体病毒Polh基因和F蛋白为靶基因,共设计9组特异性环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）引物,建立以LAMP技术为基础的快速检测技术。（4）本研究建立了以落叶松尺蠖核型多角体病毒建立特异性环介导等温扩增（LAMP）检测技术,可实现10min快速检测,灵敏度达100万倍,具有良好的特异性,荧光LAMP与显色LAMP灵敏度一致。相对于传统的PCR方法,检测效率大幅度提高。有助于了解病毒在寄主种群中的动态变化,为今后深入研究和揭示昆虫病毒流行机制和规律提供技术支撑。（5）测序了落叶松尺蠖线粒体基因组（Gen Bank登录号:MN046105）,这是该亚科线粒体基因组的新代表。几乎完整的线粒体基因组总共15250 bp,由13个蛋白质编码基因,两个r RNA和22个mRNA组成。落叶松尺蠖非常独特在建立室内人工饲养一直是一大问题,因此病毒繁殖比较困难,通过线粒体基因组进化分析,为寻找合适的替代寄主做理论基础。
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