【摘 要】
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目的:为制备实验用犬补体受体单克隆抗体（Complement receptor type 1（CR1）-like Mc Ab,CR1-L Mc Ab）,本实验以犬为研究对象开展实验,以期为课题组后期“犬类补体受体分子功能研究”和“犬类补体受体杂聚抗体”等方面的研究提供理论数据和技术手段。方法:本实验以健康比格犬为研究动物进行实验。实验方法如下:1)运用普通PCR技术克隆犬CR1-L基因的c DNA
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目（31702221）； 山西省“1331 工程”重点创新团队建设项目； 山西省高等学校科技创新项目（2019L0364）；
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目的:为制备实验用犬补体受体单克隆抗体（Complement receptor type 1（CR1）-like Mc Ab,CR1-L Mc Ab）,本实验以犬为研究对象开展实验,以期为课题组后期“犬类补体受体分子功能研究”和“犬类补体受体杂聚抗体”等方面的研究提供理论数据和技术手段。方法:本实验以健康比格犬为研究动物进行实验。实验方法如下:1)运用普通PCR技术克隆犬CR1-L基因的c DNA片段。2)运用原核表达技术制备免疫抗原并通过Ni柱亲和纯化蛋白,以SDS-PAGE技术对抗原进行鉴定。3)长程免疫模型小鼠,构建瘤细胞株;培养瘤细胞并体内扩大增殖,收获犬类补体受体单克隆抗体,以机械过滤、亲和层析、中压蛋白纯化的技术路线纯化所分泌的单克隆抗体。4)通过SDS-PAGE和Western blot技术对CR1-L Mc Ab的蛋白特性及纯度进行检测。结果:1)通过普通PCR技术克隆得到大小为606 bp的犬CR1-L的c DNA片段。2)抗原分子原核表达成功,经过SDS-PAGE检测大小符合预期。3)瘤细胞构建成功,生长状态良好;小鼠体内增殖瘤细胞成功,收获大量含犬CR1-L Mc Ab的腹水;腹水除杂后进行还原性SDS-PAGE对制备的犬CR1-L Mc Ab进行检测,结果可见大小约为50k Da,30 k Da的印迹条带,符合单抗的特征。4)Western blot技术对犬CR1-L Mc Ab进行特异性检测,标签抗体孵育后可见阳性免疫印迹条带。结论:本研究成功构建了可稳定生产犬CR1-L Mc Ab的杂交瘤细胞株,并获得犬CR1-L Mc Ab,为课题组进一步研究动物红细胞免疫功能的分子机制提供理论数据。
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