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目的：观察沉默PDE4B对内毒素刺激后大鼠小胶质细胞释放炎性因子的影响。方法：24孔板接种原代培养的小胶质细胞。实验第一部分：收集细胞采用蛋白印迹(Western bolt)法测定磷酸二酯酶4(Phosphodiesterase 4,PDE4)四种亚型(PDE4A、PDE4B、PDE4C和PDE4D)的蛋白含量。第二部分：随机将细胞分为8组：空白对照组、LPS组、单纯载体组、错配siRNA组、PDE4A-siRNA组、PDE4B-siRNA组、PDE4C-siRNA组和PDE4D-siRNA组,空白对照组与LPS组细胞不进行转染；其余6组分别转染LipofectaminTM RNAiMAX、错配siRNA、 PDE4A siRNA、PDE4B siRNA、PDE4C siRNA和PDE4D siRNA,48h后收集各组细胞采用实时荧光定量PCR (Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction, RT-qPCR)及酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)分别测定PDE4四种亚型的mRNA和细胞内cAMP的表达水平。除空白对照组外其余7组细胞在转染48h后分别给予100ng·ml-1 LPS,刺激30min后收集各组细胞采用ELISA法测定细胞内cAMP的表达水平。第三部分：随机将细胞分为5组：空白对照组、LPS组、单纯载体组、错配siRNA组、PDE4B-siRNA组,空白对照组与LPS组细胞不进行转染,单纯载体组、错配siRNA组、PDE4B-siRNA组分别转染相应的siRNA,除空白对照组外其余4组细胞在转染48h后分别给予100ng·ml-1LPS,培养24h后收集各组细胞培养液采用ELISA法测定肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor a, TNF-a)和白细胞介素1β (interleukin-1β, IL-1β)的表达水平,收集各组细胞采用Western blot法测定细胞外调节蛋白激酶(Extracellular signal-Regulated Kinase, ERK)和磷酸化ERK (phosphorylationExtracellular signal-Regulated Kinase,p-ERK)的蛋白表达水平。结果：PDE4四种亚型蛋白在小胶质细胞内均有表达；转染48h后,PDE4A-siRNA、 PDE4B-siRNA、PDE4C-siRNA和PDE4D-siRNA可分别明显抑制相应PDE4亚型mRNA的表达(P<0.05),各组细胞内cAMP的含量无明显改变(P>0.05)；LPS刺激后各组细胞内cAMP的含量均比空白对照组明显增高(P<0.05),与LPS组相比,仅PDE4B-siRNA组细胞内的cAMP含量明显升高(P<0.05)；与空白对照组相比,LPS组、单纯载体组、错配siRNA组、PDE4B-siRNA组TNF-a和IL-1β释放水平均明显升高,小胶质细胞p-ERK蛋白表达上调(P<0.05)：与LPS组相比,仅PDE4B-siRNA组TNF-a和IL-1β释放水平降低,p-ERK蛋白表达下调(P<0.05),单纯载体组和错配siRNA组差异无统计学意义(P>0.05)；5组小胶质细胞ERK表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论：PDE4B-siRNA可有效抑制小胶质细胞PDE4B mRNA的表达,明显升高LPS刺激后细胞内的cAMP含量,抑制炎性因子的释放,机制可能与减少ERK的磷酸化有关。