论文部分内容阅读
约90%的传染性疾病是病原体通过入侵机体局部黏膜引起的,黏膜成为机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线。黏膜疫苗不仅能在接种部位诱导分泌特异性抗体,还能同时引起系统性免疫应答,因此接种黏膜疫苗是预防和控制这类疾病的有效手段之一。沙门菌是常见的黏膜病原体,主要经污染的食物或水感染人和动物。为预防和控制沙门菌引起的人兽共患病,对沙门菌疫苗的研究已持续了几十年。其中,基于鼠伤寒沙门菌的疫苗研究得最多,目前已鉴定的200多种鼠伤寒沙门菌血清亚型中,又以鼠伤寒沙门菌UK-1的减毒衍生物的免疫原性为佳。常用的用于致弱细菌毒力的方法是利用基因工程方法调控其重要基因的表达或将这些基因直接缺失。全局调控基因就属于沙门菌的一类非常重要的基因。以前的研究表明,将UK-1的某一全局调控基因缺失后,能使其毒力大大减弱,且保留着较强的免疫原性,能抵抗对UK-1的致死性感染。但UK-1各全局调控调控基因减毒株诱导系统性体液免疫应答和黏膜免疫应答的能力尚未见研究进行综合性的比较。基于此,本研究构建了△crp UK-1、 △envZ UK-1、△fis UK-1、△fur UK-1、△hilA UK-1、△mlc UK-1和△phoP UK-1等7株鼠伤寒沙门菌UK-1全局调控基因突变株,然后检测经口免疫小鼠后各突变株激发的血清IgG抗体水平以及唾液、阴道洗脱液和粪便中的分泌型IgA抗体水平,并分析比较了各突变株在小鼠体内诱导系统性体液免疫应答和局部黏膜免疫应答的能力。结果表明,不同的全局调控基因突变株诱导系统性体液免疫应答的能力及在不同黏膜部位诱导局部免疫应答的能力是不同的。在血液中,△fur、△envZ、 △mlc突变株能诱导较高水平的OMP特异性IgG抗体；△crp、△fur、△envZ、△phoP则能诱导产生较高水平的LPS特异性IgG抗体。在口腔内,以△envZ、△fur、△phoP诱导分泌的OMP特异性sIgA抗体水平为高；LPS特异性sIgA抗体水平则以△crp、 △fur、△phoP刺激分泌的较高。在阴道内,△crp、△fur诱导产生OMP特异性sIgA的能力较强；△crp、△fur、△phoP诱导产生LPS特异性sIgA抗体的能力较强。在直肠内,△crp、△envZ、△mlc突变株诱导分泌OMP特异性sIgA的能力较强；△crp、△envZ、 △mlc、△phoP刺激分泌LPS特异性sIgA的能力较强。尽管在不同部位诱导免疫应答的能力不同,但所有的突变株对野生型UK-1的致死性感染都提供了完全的保护作用且存活小鼠未表现出不健康的表观症状。总的来说,本研究为哪些基因突变应用到减毒沙门菌疫苗的构建以提高其在小鼠各部位尤其是局部黏膜部位诱导的免疫反应提供了基本的参考数据。