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研究背景长期慢性紫外线照射可使皮肤加速衰老甚至出现癌变,这就是皮肤慢性光老化。紫外线照射可使人皮肤成纤维细胞(Human dermal fibroblast,HDFs)合成胶原减少,并诱导皮肤中多种细胞产生基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase,MMP)降解胶原,造成了在皮肤光老化过程中结缔组织特征性损伤。皮肤光老化的体外研究需建造光老化细胞模型,目前研究应用较热门的是应激诱导的早衰(Stress-induced premature senescence,SIPS)模型。我们及国内外多个研究小组均通过中波紫外线(Ultraviolet B,UVB)照射HDFs成功构建了UVB-SIPS模型。经反复亚毒性剂量UVB照射后的HDFs在不进入凋亡或死亡状态下,表现出复制性衰老的一些特征。芒果苷是一种黄酮类化合物,不仅可抑制UVB照射后无毛小鼠皮肤的皱纹形成、皮肤增厚和胶原减少的慢性光老化现象,还能减少人角质形成细胞MMP的分泌,并能清除紫外线诱导的氧自由基生成,证实芒果苷为一种有效的光防护剂。但是,芒果苷在UVB诱导HDFs早衰过程是否有干预作用尚未见报道。目的芒果苷能否干预UVB-SIPS进程,探讨其发挥抗紫外线诱导早衰作用机制。方法1.细胞培养HDFs来自健康青壮年男性包皮环切术后的组织,取对数生长期6-12代细胞进行实验。2.芒果苷浓度选择分别以含0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0mg/L芒果苷的培养基孵育HDFs,培养24、48和72h后,以CCK-8法观察芒果苷对HDFs毒性作用。3.UVB照射予以HDFs每天1次10mJ/cm2UVB照射,每次UVB处理后选择含合适浓度芒果苷的培养基培养,共照射5天。4.芒果苷对UVB照射后HDFs衰老指标的影响CCK-8法检测细胞增殖活性,衰老相关的 β-半乳糖苷酶(Senesceneassociated-β-galactosidase,SA-β-Gal)化学染色法检测衰老细胞,流式细胞仪检测细胞周期G1期阻滞率。5.芒果苷对UVB照射后HDFs胶原和基质金属蛋白酶基因表达的影响RT-PCR法检测MMP1、MMP3、COL1a1、COL3a1基因的表达。6.芒果苷对UVB照射后HDFs衰老相关基因和蛋白的影响RT-PCR法和蛋白印迹法分别检测p53、p21、p16衰老相关基因及蛋白的表达与合成。结果1.1.0、2.0和4.0 mg/L芒果苷无细胞毒性作用与Omg/L芒果苷组比较,1.0～4.0mg/L芒果苷作用细胞24、48及72h后,HDFs细胞增殖活性无明显差异(P>0.05)。2.芒果苷可减轻UVB照射诱导的HDFs早衰与单纯UVB-SIPS组比较,SIPS+各浓度芒果苷处理组(1.0、2.0及4.0mg/L)的细胞增殖活性随药物浓度上升而增高(P<0.05),SA-β-Gal染色阳性率随药物浓度上升而降低(除SIPS+芒果苷1.0mg/L组,余P<0.05),细胞G1期阻滞率随药物浓度上升而降低(P<0.05)。3.芒果苷可促进UVB照射后HDFs的COL1a1和COL3a1基因表达,并降低MMP1和MMP3基因表达与单纯UVB-SIPS组比较,SIPS+各浓度芒果苷处理组(1.0、2.0及4.0mg/L)的MMP1和MMP3随药物浓度升高而降低(P<0.05),COL1a1和COL3a1呈相反变化(除SIPS+芒果苷1.0mg/L组,余P<0.05)。4.芒果苷可促进UVB照射后HDFsp53、p21、p16衰老相关基因和蛋白表达与单纯UVB-SIPS组比较,SIPS+各浓度芒果苷处理组(1.0、2.0及4.0mg/L)的p53、p21、p16衰老基因和蛋白表达随药物浓度增加而下降(P<0.05)。结论芒果苷能抑制UVB-SIPS进程,具有抗紫外线诱导的早衰作用。