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目的血管平滑肌细胞的异常增殖、迁移和表型转换是动脉粥样硬化的主要发病基础,研究其分子机制可以揭示动脉粥样硬化发病机制,发现新的治疗靶点。在血管受到损伤过程中,血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)从收缩表型转变为合成表型,VSMC的过度增殖和迁移,导致新生内膜的形成。ARC(Apoptosis repressor with caspase recruitment domain)是一种内源性凋亡抑制蛋白,在心肌细胞中表达较高,发挥心肌保护作用。ARC是否在VSMC中发挥作用、参与动脉粥样硬化的发生、发展尚不清楚。本课题将研究ARC在VSMC中的表达水平,是否参与VSMC增殖、迁移及表型转换,并揭示其下游调控机制。方法分别采用Western blot和实时荧光定量PCR检测ARC、YAP(Yes associated protein)和14-3-3ε的蛋白水平和mRNA水平;利用免疫组化检测ARC在人正常血管组织和动脉粥样硬化患者血管组织中的表达差异。采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)和EdU实验分析VSMC的增殖情况,Transwell实验用来评估细胞的迁移情况。同时,使用Western blot的方法验证ARC是否参与调控VSMC的收缩型标记蛋白的表达。随后,我们通过分离细胞的细胞核、细胞质和线粒体验证ARC的亚细胞定位,采用细胞免疫荧光的方法验证YAP的入核。最后我们采用免疫共沉淀的方法验证ARC是否与YAP和14-3-3ε有直接结合的关系。结果ARC在动脉粥样硬化患者组织中和ApoE敲除小鼠高脂喂养诱导的小鼠动脉粥样硬化模型以及在大鼠球囊损伤模型中的表达量与对照组相比都明显上调,说明ARC可能参与血管损伤以及动脉粥样硬化的发生发展;在细胞水平上,ARC在VSMC中有相对较高的表达,且在血小板衍生生长因子BB(Platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)的作用下ARC的表达量上调;与对照组相比,抑制了内源ARC的表达后VSMC的增殖迁移水平明显降低;同样地,过表达ARC后促进了VSMC的增殖迁移以及表型转换的发生。通过149位点的苏氨酸突变的腺病毒载体的使用,验证ARC促进VSMC增殖迁移和表型转换的功能不依赖于其线粒体定位。机制上,ARC通过与14-3-3ε的结合来促进YAP的入核,从而促进VSMC增殖迁移和表型转换。另外,进一步验证了p53在转录水平负调控ARC的表达,并在细胞增殖和表型转换过程中调控ARC发挥功能。结论ARC在细胞水平上促进VSMC的增殖迁移和表型转换;ARC通过与14-3-3ε的结合促进YAP的入核来调节VSMC增殖迁移和表型转换;另外,p53转录抑制ARC的表达参与ARC介导的VSMC增殖、迁移及表型转换。总之,我们的研究可能为治疗动脉粥样硬化或其他血管增生性疾病提供新的思路和靶点。