还原型辅酶Q10纳米脂质体组合物的制备及稳态化研究

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辅酶Q10包括还原型(Co Q10H2)和氧化型(Co Q10),在体内发挥着加速三磷酸腺苷的产生及抗氧化等作用。Co Q10H2抗氧化性优于Co Q10,但具有水溶性差、易被分子氧氧化等缺点,因此至今未得到广泛的应用。纳米脂质体可同时包埋水溶性及脂溶性物质,用它对Co Q10H2及抗氧化剂进行复合包埋,可解决上述应用难题。本论文以复合脂质(蛋黄卵磷脂和吐温80)为壁材包埋Co Q10H2,同时辅以维生素E乙酸酯(VE乙酸酯)、抗坏血酸(Vc)等具有协同抗氧化作用的天然抗氧化剂,制备Co Q10H2纳米脂质体组合物,通过贮藏实验优化确定了VE乙酸酯及Vc的添加量;探究了Co Q10H2及抗氧化剂的载入对脂质双分子层流动性和结构特性的影响,从分子水平揭示了Co Q10H2稳态化的机理。采用高效液相色谱、动态光散射等方法,以体系中Co Q10H2占辅酶Q10总量的质量比为指标,研究在纳米脂质体组合物的制备与贮藏过程中,脂质体体系及几种代表性醇溶性、水溶性抗氧化剂的添加对Co Q10H2稳态化的影响。结果表明,脂质体双分子层通过阻氧作用,能够有效延缓Co Q10H2的氧化。而当脂质体辅以VE乙酸酯及Vc时,能够进一步提高Co Q10H2的稳定性。当VE乙酸酯与Vc添加量为Co Q10H2的1 mol倍与3mol倍时,对Co Q10H2的保护效果最佳,制得的纳米脂质体组合物中Co Q10H2占辅酶Q10总量的99.6%。4℃下避光贮藏60天后,还原型仍占88.3%,辅酶Q10、VE乙酸酯及Vc的保留率分别为92.3%、93.9%与16.8%,丙二醛的生成受到明显抑制,贮藏期间体系的平均粒径及多分散指数(PDI)分别维持在100nm及0.3以下。在VE乙酸酯、Vc的最佳添加量下,进一步考察Co Q10H2的载量对纳米脂质体组合物的贮藏稳定性及超微结构的影响。研究结果表明,载量在磷脂的12%~48%(mol/mol)时,Co Q10H2的氧化非常缓慢,而当载量超过36%(mol/mol)时,辅酶Q10、VE乙酸酯的包封率骤然下降,粒径及PDI明显增大,体系变得很不稳定。原子力显微镜分析显示,载入磷脂的12%~24%(mol/mol)Co Q10H2的纳米脂质体囊泡呈规整的球形,体系分散均匀;当载量达到36%(mol/mol)以上时囊泡粒径变大、形态变得不规则、并出现大颗粒聚集。借助脂质体的包埋,Co Q10H2的水容性提高至3.84mg/m L。在磷脂的12%(mol/mol)载量下,纳米脂质体组合物体系有助于提高Co Q10H2及VE乙酸酯的生物可给率。采用荧光探针、激光共聚焦拉曼光谱、电子自旋共振等手段,从脂质体双分子层流动性和结构特性的角度分析纳米脂质体中芯材稳态化的机理。结果表明,添加磷脂的12%~24%(mol/mol)的Co Q10H2以及6%~12%(mol/mol)的VE乙酸酯,能够增强脂质双分子层的稳定性,降低其流动性。Vc的载入对脂质双分子层则无明显作用。
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