【摘 要】
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在正常情况下,机体对自由基的产生和清除是处于平衡状态的。氧化应激是指机体在各种刺激下产生的活性氧自由基（ROS）过多,超过了机体本身清除它们的能力,导致氧化和抗氧化状态的不平衡,引起组织损伤和各种疾病。抗氧化肽是一种天然抗氧化剂,其结构简单,在不同条件下有良好的稳定性,无危险的免疫反应,不仅有较强的抗氧化活性,还具有一定的营养和功能特性而被广泛研究。本文以英国红芸豆蛋白为原料,利用碱性蛋白酶进行酶
【基金项目】
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十三五国家重点研发计划项目（编号:2017YFD0400201）； 黑龙江省农垦总局重点科研计划项目（编号:HKKYZD190710）；
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在正常情况下,机体对自由基的产生和清除是处于平衡状态的。氧化应激是指机体在各种刺激下产生的活性氧自由基（ROS）过多,超过了机体本身清除它们的能力,导致氧化和抗氧化状态的不平衡,引起组织损伤和各种疾病。抗氧化肽是一种天然抗氧化剂,其结构简单,在不同条件下有良好的稳定性,无危险的免疫反应,不仅有较强的抗氧化活性,还具有一定的营养和功能特性而被广泛研究。本文以英国红芸豆蛋白为原料,利用碱性蛋白酶进行酶解,首先优化了英国红芸豆蛋白的酶解条件,然后利用超滤法对抗氧化肽进行分级,研究不同分子量肽段的体外抗氧化活性,并用抗氧化活性最高组分饲喂斑马鱼,探究英国红芸豆抗氧化肽对2,2’-偶氮二异丁基脒二盐酸盐（AAPH）诱导的氧化应激斑马鱼的保护作用。对英国红芸豆抗氧化肽的体内抗氧化作用机制进行了初步研究,为英国红芸豆抗氧化肽精深加工产品的开发与应用提供理论依据。主要研究内容及结果如下:以水解度为指标,利用单因素试验和正交试验确定的最佳酶解条件为底物质量分数10%、酶解时间3 h、酶解温度50℃,pH 9.5。将酶解产物进行超滤,发现相对分子质量小于1 k Da的组分（BRKBPAPC）抗氧化活性最高,酶解条件优后化较之前方法相比抗氧化活性显著提高（P＜0.05）,DPPH自由基清除率提高了28.62%,还原力提高了5.30%。经研究,较未超滤肽相比BRKBPAPC经体外模拟消化后抗氧化活性显著提高（P＜0.05）。对英国红芸豆进行营养价值分析发现英国红芸豆是一种良好的植物蛋白源,BRKBPAPC是一种优质植物源多肽。利用AAPH诱导建立氧化应激斑马鱼模型,探究BRKBPAPC对氧化应激斑马鱼抗氧化系统、脂代谢及行为学的影响。将斑马鱼随机分为对照组、模型组、VC阳性对照组、BRKBPAPC低、中、高剂量组。（1）与模型组相比,BRKBPAPC能显著提高（P＜0.05）斑马鱼体内过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和总抗氧化能力（T-AOC）,显著降低（P＜0.05）丙二醛（MDA）含量,随着处理时间及浓度的增加,效果越好。高剂量抗氧化肽处理21 d时,CAT、SOD、T-AOC、GSH-Px分别增至28.29±3.29、126.59±6.39、2.07±0.18、84.75±7.77 u/mgprot,MDA含量降至3.35±0.29 nmol/mgprot。（2）与对照组相比,氧化应激斑马鱼的脂代谢受到了破坏,甘油三酯（TG）显著增加（P＜0.05）,总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）含量显著降低（P＜0.05）;而BRKBPAPC具有调节斑马鱼脂代谢的能力并随着浓度的增加斑马鱼各脂代谢指标逐渐恢复正常水平。高剂量BRKBPAPC处理21 d时,TG降至1.03mmol/gprot;TC、LDL-C、HDL-C分别增至0.65、0.063、0.44 mmol/gprot。（3）随着处理时间的延长,模型组斑马鱼不活泼,触壁反射活动减少,行为轨迹变短,说明AAPH引起了斑马鱼的氧化应激反应,对运动行为有明显的抑制作用。随着BRKBPAPC浓度的增加和作用时间的延长,斑马鱼行为轨迹增多,高速运动次数、时间、距离显著上升（P＜0.05）。斑马鱼变得活泼,轨迹增多,说明BRKBPAPC可有效改善氧化应激引起的斑马鱼的行为减弱。综上所述,BRKBAPC具有良好的体内抗氧化活性,对AAPH诱导的氧化应激斑马鱼具有一定的保护作用。本研究为英国红芸豆产品开发提供理论依据。
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