石斛是一味贵重的滋阴中药。2010版中国药典规定石斛来源为金钗石斛、鼓槌石斛和流苏石斛的栽培品,及上述三种石斛的“近似种”,并将铁皮石斛单独列出。但由于传统应用的石斛资源日渐枯竭,远远不能满足市场的巨大需求,因此很多石斛属的其它植物被发掘应用。目前我国商品流通的药用石斛植物来源有近四十种。其中石斛枫斗是市场上广受欢迎的主流产品,除药典规定的铁皮枫斗外,主要包括霍斗、紫皮枫斗、铜皮枫斗、水草枫斗、刚节枫斗、虫草枫斗等。由玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛等石斛加工成的枫斗,由于价格相对较低,被称为“水草枫斗”。这三种石斛无论是原植物,还是加工成的枫斗,形态特征都具有较大的相似性,很难鉴别区分。由于枫斗品种(包括水草枫斗在内)的多样性和相似性,并缺乏有效可控的质量标准和监管,造成了石斛市场的严重混乱,掺假掺伪现象层出不穷。目前对玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛的质量控制研究的文献报道较少。本研究主要采用中药特征图谱技术结合薄层色谱方法,探讨三种水草枫斗类石斛的质量控制体系,以期对石斛类药材的质量评价和市场的规范化,及其产品的深度开发利用提供有益的参考。目的:(1)分别构建玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛的高效液相色谱(HPLC)特征图谱,探讨三种不同石斛的内在特征性,比较差异性,并对其分类合理性和可行性进行探讨。(2)利用建立的HPLC特征图谱分析方法,对广州清平药材市场和各药店出售的水草枫斗进行研究,初步了解水草枫斗市售现状。(3)对玫瑰石解、兜唇石斛和束花石斛的生物碱类成分和其它成分的薄层色谱进行比较研究,为水草枫斗类石斛的薄层鉴别研究提供科学依据。方法:(1)采用HPLC特征图谱技术,建立玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛特征图谱分析方法,对不同石斛的多个批次进行测定,采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件(2004A版),分别生成三种石斛的共有模式,计算相似度,并进行比较。(2)采用HPLC特征图谱技术分析24个批次的市售水草枫斗,应用SPSS20.0软件进行聚类分析,与建立的玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛特征图谱共有模式进行比较,计算相似度,判断其基源。(3)采用薄层色谱法(TLC)对玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛的生物碱类及其它成分进行研究,通过斑点的位置、大小和数量的差别,将不同石斛区分开来。同时与金钗石斛(药典规定石斛品种之一)所含的生物碱类成分进行薄层比较。成果:(1)分别建立了玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛的HPLC特征图谱。12批玫瑰石斛共标示出41个共有峰,相似度为0.901～0.986;10批兜唇石斛共标示出33个共有峰,相似度为0.794～0.978;10批束花石斛共表示出21个共有峰,相似度为0.939～0.989。三种石斛共有模式之间的相似度低,仅为0.024～0.135。表明三种石斛品种种内具有较高的相似性,但不同石斛间却存在显著的化学组成差异。(2)建立了 24批广州市场市售水草枫斗HPLC特征图谱,聚类分析将其分为5类,其中第Ⅰ类(共3批)和第Ⅱ类(共16批)样品与兜唇石斛特征图谱大体一致,与10批兜唇石斛共有模式的相似度为0.657～0.880。第Ⅲ类(共1批)样品与束花石斛特征图谱基本一致,与其共有模式的相似度为0.906。其余4批次尚不能确定其基源,也尚未收集到玫瑰石斛制成的水草枫斗。研究提示,当前广州市场上流通的水草枫斗可能主要来源于兜唇石斛。选取第Ⅱ类中的10批样品建立了共有模式,共标示出33个特征共有峰,相似度达0.970～0.998,其共有模式与兜唇石斛共有模式的相似度为0.725,造成相似度不高的原因可能是产地、加工的影响,或者市售样品中掺有其它品种的石斛。(3)玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛生物碱类及其它成分的TLC均存在较明显差异,生物碱类成分薄层方法能有效鉴别三种石斛。三种石斛均含有生物碱成分,与金钗石斛相比,只有金钗石斛在与石斛碱对照品相应位置有斑点。在另一薄层鉴别中,与石斛酚对照品相应的位置上,玫瑰石斛和兜唇石斛有相同颜色的斑点。结论:(1)本文对玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛三种石斛进行了 HPLC特征图谱研究,该方法能够比较全面真实地反映三种石斛内在化学成分的种类和数量,体现不同石斛的特征性和差异性,可以将三种水草枫斗基源石斛明显区分。同时采用薄层色谱法对三种石斛进行鉴别,该法操作简便,灵敏可靠,可以较快的将水草枫斗类石斛区分。(2)采用建立的特征图谱分析方法,对市售水草枫斗进行了分析,初步地了解了该类药材商品的市场现状。目前广州市场上流通的水草枫斗约80%与兜唇石解具有类似的特征峰,同时也充斥了很多不同基源的石斛,它们价格相差很大,品质良莠不齐。(3)本文为玫瑰石斛、兜唇石斛和束花石斛的鉴别提供了实验基础和技术方法,对石斛类药材的鉴别和质量评价具有一定的参考价值。建议尽快采取切实有效的措施规范石斛市场,以利于石斛的深入开发和临床合理应用。