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中国大鲵(Andrias davidianus blanchard)俗称娃娃鱼,属两栖纲、有尾目、隐鳃鲵科,是我国特有的大型珍稀两栖动物,经济价值和药用价值极高,目前已成为大鲵主产地的水产养殖新品种。近年来已在两栖动物皮肤中发现大量有很高应用价值的活性物质,但尚无大鲵皮肤活性成分的报道。cDNA文库构建是发现、获得新基因的重要手段之一,同时建立濒危野生动物cDNA文库也是物种保护和种质资源保存的最为有效的方法。为此,构建大鲵皮肤cDNA文库、筛选免疫基因可为大鲵皮肤活性物质开发、免疫抗病机制研究、生长发育、代谢研究以及资源保护研究奠定基础。本研究以健康大鲵背部皮肤为材料,采用SMART技术构建大鲵皮肤cDNA文库,后经过文库质量检测,ESTs测序及分析(Cross-match、Phrap软件、基因功能注释、COG软件归类、免疫基因筛选),并对获得的大鲵肌动蛋白相关2/3复合物-5样蛋白(Arp2/3 complex subunit 5-like, Arpc5l)和胞质动力蛋白轻链(Dynein light chain, LC8-type 2, Dynll2等2个全长基因进行了序列分析和组织表达研究。获得如下结果:(1)、大鲵初级文库库容量为1.50x106 cfu,文库重组率为94.8%,插入片段平均长度约为1 kb。(2)、从随机挑选的400个阳性克隆中获得325个有效ESTs,经BLAST比对,其中214条ESTs为已知基因序列,214条ESTs可归为9大类:一般功能(7.5%);生命代谢(14.0%);细胞骨架及结构形成(13.0%);细胞周期调控(2.5%);分泌型活性物质(31.3%);基因重组和修复(7.0%);蛋白翻译后修饰(5.6%);信号转导(12.6%);功能未确定基因(6.5%)。(3)、大鲵皮肤中有两类基因表达量较高,一类为免疫相关基因:Galectin-3(15.4%)、OGN(1.5%)、Ovoinhibitor precursor(1.2%)、Mcp(1.2%)、Fth1(0.9%)、TribSPI(0.9%);另一类为代谢基因:CO II(,4.3%)、NADH dehydrogenase subunit 2(1.2%)、COⅢ(0.9%)、Triosephosphate isomerase(0.9%)等。这与大鲵皮肤具有的免疫、呼吸、渗透压平衡等多种生理功能相一致。(4)、初步筛选鉴定出7个主要免疫基因:Galectin-3、Ovoinhibitor precursor、Mcp、Fth1、TribSPI、ANXA1和Tβ-4,且表达量均超过0.5%。此外,促炎症因子MIF、Tubulin;肽基脯氨酰顺反异构酶类似物基因以及肉质性状相关基因CSTA1、CSTB等也有分布。(5)、分离获得了Arpc5l及Dynll2全长cDNA序列。大鲵Arpc5l全长699 bp,编码153个氨基酸;无信号肽,二级结构以α-螺旋为主,该蛋白具有肌动蛋白活性,能参与微管运动且和癌细胞的转移相关;大鲵Arpc5l编码蛋白具有强保守性;Arpc5l在大鲵皮肤、肌肉、肠、肝脏、脾脏、肺、胃以及肾脏组织中广泛表达,且在肾、肠、肌肉中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。大鲵Dynll2全长682 bp,编码104个氨基酸。编码蛋白中碱性氨基酸含量较高,无信号肽,二级结构以α-螺旋为主;该蛋白具有马达蛋白活性;大鲵Dynll2编码蛋白具有很强的保守性。Dynll2基因在肌肉中高表达,在其他组织中低度表达。本研究中分离出的Arpc5l、Dynll2基因均能参与微管运动且和癌细胞的转移相关。