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目的:检测长链非编码RNA(lncRNA)ANRIL(INK4位点的长链反义非编码RNA)在子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织及人子宫内膜癌细胞系HEC-1A中的表达情况,应用si RNA-ANRIL(ANRIL的小干扰RNA)“下调”ANRIL的表达后,观察其对子宫内膜癌细胞HEC-1A增殖能力的影响,并进一步分析其表达水平与临床病理特征参数间关系及其临床意义。方法:1选取2009年4月至2015年12月,就诊于河北医科大学第一医院患者的新鲜子宫内膜组织标本80例,其中正常子宫内膜组织标本40例做为对照组(包括分泌期、增殖期及萎缩期子宫内膜组织),子宫内膜癌组织标本40例做为实验组(包括内膜样腺癌32例、腺癌伴鳞状上皮分化3例、浆液性腺癌3例、粘液性癌1例、透明细胞癌1例)。2使用Trizol RNA提取法提取收集的80例子宫内膜组织标本并利用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应合成第一链c DNA。3通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,Real-time PCR)方法检测正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中lncRNA ANRIL的表达水平。4利用CO2细胞培养箱培养子宫内膜癌细胞株HEC-1A(中分化),以进行细胞株的复苏、传代、冻存等用于本研究的细胞学实验。5本研究的细胞转染实验是使用脂质体(Lipofectamine 2000转染试剂)介导的,使外源基因si RNA-ANRIL或si RNA-NC(negative control)通过膜融合的方法进入细胞内,激发与之互补的目标m RNA发生特异性降解,从而导致子宫内膜癌细胞株HEC-1A中靶基因ANRIL的沉默,培养48小时后,分别检测转染si RNA-ANRIL(实验组)、转染si RNA-NC(阴性对照组)及未经转染处理正常培养的子宫内膜癌细胞系(空白对照组)子宫内膜癌HEC-1A细胞中lncRNA ANRIL的表达情况。6平板细胞克隆形成实验使用结晶紫(Crystal violet)染色培养皿中的克隆细胞团,于低倍显微镜下计数,检测转染si RNA-ANRIL(实验组)、转染si RNA-NC(阴性对照组)及未经转染处理正常培养的子宫内膜癌细胞系(空白对照组)培养2周后各组细胞的增殖能力。结果:1 ANRIL在子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中的相对表达量分别为19.89(5.26,61.42)和6.08(1.62,27.79),子宫内膜癌组织中ANRIL的相对表达量明显要高于正常子宫内膜组织,两者的差异有统计学意义(P<0.05),且子宫内膜癌病理分级为Ⅲ级的癌组织中ANRIL的相对表达量较其在Ⅰ-Ⅱ级癌组织中的表达量明显升高;而子宫内膜癌组织中ANRIL的表达量与患者年龄、FIGO病理分期、有无盆腔淋巴结转移无关(均P>0.05),同时ANRIL在雌激素受体(ER)阴性和阳性表达的子宫内膜癌组织中的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05),在孕激素受体(PR)阴性和阳性表达的子宫内膜癌组织中的相对表达量差异也无统计学意义(P>0.05),ANRIL在是否患有糖尿病或高血压疾病的患者中,其相对表达量差异仍无统计学意义。ANRIL在转染si RNA-ANRIL(实验组)和si RNA-NC(阴性对照组)48小时后的细胞系和子宫内膜癌细胞系HEC-1A(空白对照组)中的表量分别为(0.323738±0.037062)、(0.439127±0.06164)和(0.406675±0.055332),3组间ANRIL的相对表达量有差异且具有统计学意义(P<0.05),实验组中ANRIL的相对表达量明显低于阴性对照组(P<0.05),同时低于空白对照组(P<0.05),而在阴性对照组和空白对照组中ANRIL的相对表达量比较,发现其表达差异无统计学意义(P>0.05)。2计数重复3次培养转染si RNA-ANRIL(实验组)的细胞系、转染si RNA-NC(阴性对照组)的细胞系和子宫内膜癌细胞系HEC-1A(空白对照组)2周后,培养皿中染色的克隆细胞团数均值分别为369、617和632,实验组的克隆细胞团数明显少于阴性对照组,同时少于空白对照组,而阴性对照组和空白对照组中克隆细胞团数的差别不明显。结论:1长链非编码RNA ANRIL在子宫内膜癌组织中的表达水平明显升高,说明ANRIL在子宫内膜癌的表达水平被“上调”了。2 ANRIL的表达量在子宫内膜癌病理分级为Ⅲ级的癌组织中显著升高,表明ANRIL可能促进了子宫内膜癌进展。3细胞克隆形成实验结果说明ANRIL可能通过某些分子生物学机制,靶向调节子宫内膜细胞的增殖并起促进作用。根据本实验结果推测,可能是某些表观遗传修饰的改变,“上调”了ANRIL的表达,过表达的ANRIL参与子宫内膜癌发病和演变过程,并在此过程中扮演了促癌基因角色。