研究背景阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是老年期痴呆最常见的类型,是一种以进行性认知功能障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病,具有较高的致残性。AD的主要病理改变是:大脑皮层及海马区的β淀粉样蛋白(Amyloidβ-peptide,Aβ)在胞外积累并形成老年斑( senile plaque, SP)、脑神经细胞内tau蛋白异常聚集形成的神经原纤维缠结( neurofibrillary tangle, NFT)、神经元突触功能异常及锥体神经细胞的丢失。其患病率随年龄增长而上升,因此,随着人类平均寿命延长和人口老龄化的出现,AD对人类健康的危害变得日益突出,已成为当前老年医学面临的最为严峻的问题之一。流行病学资料显示,长期服用阿司匹林的人群中AD的患病率明显低于未服用者。如果能进一步证实阿司匹林在AD防治中的作用,阐明其机制,将有利于AD的预防与治疗。研究目的本研究在体内条件下用侧脑室定向注射β淀粉样蛋白(Aβ)模拟AD的基本病理改变,用阿司匹林进行干预,测试大鼠在Morris水迷宫中的逃避潜伏期,并用ELISA检测大鼠脑组织内IL-6、IL-1β和TNFα,用Western Blot方法检测NF-κB及iNOS蛋白。同时观察阿司匹林对AD模型海马CA1区神经元的影响。在本研究基础上,探讨阿司匹林对AD是否具有防治作用及其机制,以期为将来临床应用阿司匹林防治AD提供部分实验室依据。研究方法本研究主要涉及的实验技术:Western Blot方法、morris水迷宫、侧脑室定向注射术、双抗体夹心酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。将50只大鼠随机分为5组,每组10只:(1)高剂量阿司匹林干预组:大鼠予含阿司匹林2mg/ml的蒸馏水溶液喂服,自由进食。3周后侧脑室内注射Aβ溶液5μl,再予含阿司匹林2mg/ml的蒸馏水溶液喂服3周,自由进食。(2)中剂量阿司匹林干预组:大鼠予含阿司匹林1mg/ml的蒸馏水溶液喂服,自由进食。3周后侧脑室内注射Aβ溶液5μl,再予含阿司匹林1mg/ml的蒸馏水溶液喂服3周,自由进食。(3)低高剂量阿司匹林干预组:大鼠予含阿司匹林0.5mg/ml的蒸馏水溶液喂服,自由进食。3周后侧脑室内注射Aβ溶液5μl,再予含阿司匹林0.5mg/ml的蒸馏水溶液喂服3周,自由进食。(4)模型组:大鼠予蒸馏水喂服,3周后侧脑室内注射Aβ溶液5μl,再予蒸馏水喂服,自由进食;(5)假手术组:大鼠予蒸馏水喂服,3周后侧脑室内注射无菌生理盐水5μl,再予蒸馏水喂服,自由进食。第6周结束时,使用morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力改变。然后处死大鼠使用ELISA方法检测大鼠脑组织内IL-6、IL-1β、6和TNFα水平。用Western Blot方法检测NF-κB及iNOS蛋白。海马区脑组织制作病理切片,HE染色后观察神经元损伤情况。研究结果1、术后3周,模型组逃避潜伏期较假手术组明显延长,分别为42.96±17.51s、27.21±13.23s,差异具有统计学意义。阿司匹林各剂量干预组逃避潜伏期较模型组缩短,差异具有统计学意义。2、海马CA1区染色显示模型组海马CA1区神经元数量明显减少,细胞排列紊乱,结构疏松。而不同剂量的阿司匹林干预组,海马CA1神经元数目和细胞排列较整齐。3、Aβ侧脑室定向注射导致NF-κB蛋白表达的增加,同时上调IL-1β、TNFα的水平。4、各不同剂量阿司匹林干预组,NF-κB蛋白表达、IL-1β、TNFα水平较模型组均减少,但IL-6无明显下降。结论侧脑室定向注射Aβ25-35能引起AD样病理改变,引起海马神经元损伤,使大鼠学习记忆能力下降。阿司匹林干预可改善AD模型大鼠的学习记忆能力。阿司匹林可能是通过抑制NF-κB信号转导通路的激活,下调IL-1β、IL-6、TNFα等的释放,从而对AD模型大鼠学习记忆能力起到保护作用。