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变应性鼻炎(AR)，中医称之为“鼻鼽”，发病率高且西药治疗存在局限，严重影响人们正常生活。研究表明Th1/Th2漂移可能是AR发病的重要因素之一。麻黄细辛附子汤(MFXD)广泛用于阳虚外感风寒所致AR。本课题组前期证实其对豚鼠AR模型作用优于辛芩颗粒，且明确了其对AR另一环节IgE介导的肥大细胞炎症介质的抑制作用及其部分物质基础的作用机制，但其对Th1/Th2调控的作用及相关成分仍需探索。
目的：
明确MFXD对阳虚AR大鼠的作用及调控Th1/Th2的功效成分，为该方临床应用和新药研发提供依据。
方法：
1、建立MFXD的HPLC-MS/MS指纹图谱，对10批样品进行相似度评价，以保证样品质量。
2、利用卵清蛋白(OVA)和氢化可的松制备阳虚AR大鼠模型;MFXD干预后，记录鼻炎症状得分，制作鼻粘膜HE及甲苯胺蓝染色切片，检测血清中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、组胺、IgE、IFN-γ和IL-4含量;流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD3+CD4+IFN-γ+Thl及CD3+CD4+IL-4+Th2细胞百分比;aRT-PCR法检测鼻粘膜T-bet、GATA-3、STAT-1和STAT-6mRNA表达。
3、通过中药系统药理学数据库及文献查阅构建MFXD小分子配体数据库;通过蛋白数据库及文献查阅收集AR及Th1/Th2相关靶蛋白;利用SYBYL进行分子对接，记录Total Score值;利用Cytoscape构建药物埠巴点网络。
4、分离正常大鼠PBMCs，检测功效成分对其存活率的影响;分离阳虚AR大鼠PBMCs，检测功效成分对其Th1/Th2漂移的作用。
结果：
1、建立了MFXD HPLC-MS/MS指纹图谱，确定了25个共有峰，指认了9个色谱峰，10批MFXD色谱图相似度均＞0.987。
2、阳虚AR大鼠表现出鼻炎和阳虚症状，且cAMP/cGMP比值显著下降(P＜0.05);对于阳虚AR大鼠，MFXD可显著降低其鼻炎症状得分、总IgE和组胺含量，有效减轻其鼻黏膜病理学损伤，高浓度MFXD可使其cAMP/cGMP和IFN-γ/IL-4比值显著升高(P＜0.01，P＜0.05);对于阳虚AR大鼠，高、中浓度MFXD可显著提高其CD3+CD4+IFN-γ+Th1/CD3+CD4+IL-4+Th2比值(P＜0.01，P＜0.05)，高浓度MFXD可显著提高其mRNA T-bet/GATA-3比值(P＜0.05)，高、中浓度MFXD可显著提高其mRNA STAT-1/STAT-6比值(P＜0.05，P＜0.05)。
3、构建了含83个化合物的配体数据库，收集了7个靶蛋白;56个小分子至少有一个Total Score值＞5;药物一靶点网络中有19个小分子度值高于平均值，最终选择其中10个进行体外实验。
4、除麻黄碱和榄香素外，柚皮素、去甲乌药碱、α-细辛脑、山奈酚、伪麻黄碱、芝麻素、角鲨烯和α-亚麻酸均可不同程度回调Th1/Th2漂移。
结论：
1、MFXD样品来源稳定，质量可控。
2、MFXD可有效改善阳虚AR大鼠的症状，回调Th1/Th2漂移，可能与影响T-bet、GATA-3、SATA-1、STAT6的表达有关。
3、10个化合物中有8个可在体外回调Th1/Th2漂移，表明它们可能是MFXD治疗AR及调控Th1/Th2漂移的主要效应成分，提示分子对接技术可以用于中药功效成分的探索。
目的：
明确MFXD对阳虚AR大鼠的作用及调控Th1/Th2的功效成分，为该方临床应用和新药研发提供依据。
方法：
1、建立MFXD的HPLC-MS/MS指纹图谱，对10批样品进行相似度评价，以保证样品质量。
2、利用卵清蛋白(OVA)和氢化可的松制备阳虚AR大鼠模型;MFXD干预后，记录鼻炎症状得分，制作鼻粘膜HE及甲苯胺蓝染色切片，检测血清中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、组胺、IgE、IFN-γ和IL-4含量;流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD3+CD4+IFN-γ+Thl及CD3+CD4+IL-4+Th2细胞百分比;aRT-PCR法检测鼻粘膜T-bet、GATA-3、STAT-1和STAT-6mRNA表达。
3、通过中药系统药理学数据库及文献查阅构建MFXD小分子配体数据库;通过蛋白数据库及文献查阅收集AR及Th1/Th2相关靶蛋白;利用SYBYL进行分子对接，记录Total Score值;利用Cytoscape构建药物埠巴点网络。
4、分离正常大鼠PBMCs，检测功效成分对其存活率的影响;分离阳虚AR大鼠PBMCs，检测功效成分对其Th1/Th2漂移的作用。
结果：
1、建立了MFXD HPLC-MS/MS指纹图谱，确定了25个共有峰，指认了9个色谱峰，10批MFXD色谱图相似度均＞0.987。
2、阳虚AR大鼠表现出鼻炎和阳虚症状，且cAMP/cGMP比值显著下降(P＜0.05);对于阳虚AR大鼠，MFXD可显著降低其鼻炎症状得分、总IgE和组胺含量，有效减轻其鼻黏膜病理学损伤，高浓度MFXD可使其cAMP/cGMP和IFN-γ/IL-4比值显著升高(P＜0.01，P＜0.05);对于阳虚AR大鼠，高、中浓度MFXD可显著提高其CD3+CD4+IFN-γ+Th1/CD3+CD4+IL-4+Th2比值(P＜0.01，P＜0.05)，高浓度MFXD可显著提高其mRNA T-bet/GATA-3比值(P＜0.05)，高、中浓度MFXD可显著提高其mRNA STAT-1/STAT-6比值(P＜0.05，P＜0.05)。
3、构建了含83个化合物的配体数据库，收集了7个靶蛋白;56个小分子至少有一个Total Score值＞5;药物一靶点网络中有19个小分子度值高于平均值，最终选择其中10个进行体外实验。
4、除麻黄碱和榄香素外，柚皮素、去甲乌药碱、α-细辛脑、山奈酚、伪麻黄碱、芝麻素、角鲨烯和α-亚麻酸均可不同程度回调Th1/Th2漂移。
结论：
1、MFXD样品来源稳定，质量可控。
2、MFXD可有效改善阳虚AR大鼠的症状，回调Th1/Th2漂移，可能与影响T-bet、GATA-3、SATA-1、STAT6的表达有关。
3、10个化合物中有8个可在体外回调Th1/Th2漂移，表明它们可能是MFXD治疗AR及调控Th1/Th2漂移的主要效应成分，提示分子对接技术可以用于中药功效成分的探索。