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花生是世界范围内广泛栽培的油料与经济作物，是全球四大油料作物之一，也是我国单产、总产和出口创汇额最高的油料作物。近年来随着对油料作物油脂代谢相关基因的分离、组织特异性启动子等分子生物学的深入研究，使利用基因工程改良花生品质成为花生分子育种研究的重要领域。为了鉴定花生Oleosin启动子和Ara h1启动子功能，本研究采用农杆菌介导的花序浸染法分别用含有CaMV35S启动子的PBI121质粒、含有花生Oleosin启动子的pB-OL1584质粒和含有花生Ara h1启动子的pB-AH1716质粒转化拟南芥，经卡那霉素抗性筛选及PCR鉴定获得转基因植株，用GUS组织化学染色法检测启动子表达的组织特异性，用荧光光度分析法测定转基因植株的GUS酶活性，用实时荧光定量PCR检测GUS基因转录水平的相对表达量；并利用电子克隆技术获得了花生WRI1基因。研究的主要结果如下：1.转基因拟南芥的获得pB-OL1584质粒转化拟南芥的转化率为0.28%，获得含Oleosin启动子的T5代株系2个；pB-AH1716质粒转化拟南芥的转化率为0.3%，获得含Ara h1启动子的T2代株系2个；PBI121质粒转化拟南芥的转化率为0.7%，获得含CaMV35S启动子的拟南芥T4代株系5个。2.花生Oleosin启动子的表达特性分析比较含花生Oleosin启动子的转基因拟南芥中不同组织的GUS酶活力，结果表明：同一植株的不同组织之间GUS酶活力差异显著，根中酶活力最强，其次是荚果，茎和叶最弱；不同单株间酶活力差异显著。单株O2-18的GUS酶活力最高，其根中GUS酶活力为4.01nmol/mg(protein)/min，荚果中为2.60nmol/mg(protein)/min，茎中为1.46nmol/mg(protein)/min，叶中为0.73nmol/mg(protein)/min。检测转基因拟南芥中GUS基因转录水平相对表达量，发现同一植株根中GUS基因相对表达量最高，其次荚果，在茎和叶中很少，几乎没有；不同单株的GUS基因相对表达量存在差异，与酶活力的检测结果一致。证明花生Oleosin启动子可驱动GUS基因在拟南芥基因组中表达，表达强度从强到弱依次为：根、荚果、茎和叶。3.花生Ara h1启动子的表达特性分析比较含花生Ara h1启动子的转基因拟南芥中不同组织的GUS酶活力，结果表明：不同组织之间GUS酶活力差异显著。根中酶活力最强，为1.748nmol/mg(protein)/min；其次是荚果，为0.946nmol/mg(protein)/min；叶中GUS酶活力为0.705nmol/mg(protein)/min，茎中最弱为0.592nmol/mg(protein)/min。检测转基因拟南芥中GUS基因转录水平相对表达量，发现根中GUS基因相对表达量最高，其次荚果，茎和叶中较少，与酶活力的检测结果一致。证明花生Ara h1启动子可驱动GUS基因在拟南芥基因组中表达，表达强度从强到弱依次为：根、荚果、叶和茎。4.三种启动子表达特性比较比较含不同启动子的转基因拟南芥植株I1-89（CaMV35S启动子）、O2-18（Oleosin启动子）和A2（Ara h1启动子）的GUS酶活力，结果表明：O2-18和A2根中酶活力分别为I1-89的0.66倍和0.29倍；茎中酶活力分别是I1-89的1.14倍和0.46倍；叶中的酶活力分别是I1-89的1.04倍和1.00倍；荚果中的酶活力分别是I1-89的2.03倍和0.74倍；证明在拟南芥荚果中花生Oleosin启动子表达高于CaMV35S启动子，在茎和叶中表达差异不明显，在根中表达低于CaMV35S启动子；花生Ara h1启动子驱动GUS基因在拟南芥中表达均低于CaMV35S启动子和花生Oleosin启动子。5.花生转录因子WRI1基因的克隆及序列分析电子克隆获得了花生WRI1的cDNA序列(AhWRI1)，AhWRI1序列长1169bp。用生物信息学方法进行序列分析，AhWRI1含一个长度为780bp的完整开放阅读框架，编码259个氨基酸。编码蛋白AhWRI1包含2个典型的AP2功能域,是亲水性蛋白，在蛋白质的三级结构上与拟南芥和油菜的WRI1相似。AhWRI1与拟南芥、油菜WRI1氨基酸保守序列同源性在81.87%-100%之间。AhWRI1无序化程度为71.8%，比拟南芥低3.8%，比油菜高2.5%。亚细胞定位显示AhWRI1在细胞核内，并预测该蛋白具有转录复制，调控及转录结合的可能性分别为0.244，0.226，0.152。