论文部分内容阅读
目的探讨U266多发性骨髓瘤细胞株及其中CD138-细胞的Wntl/β-Catenin信号通路的表达情况:尝试β-catenin-shRNA对CD138-细胞β-catenin表达的干扰,观察β-catenin-shRNA干扰后CD138-细胞的生长的影响及β-catenin mRNA及β-catenin蛋白表达水平的变化,从而为临床多发性骨髓瘤的β-catenin-shRNA慢病毒干扰治疗提供实验研究信息。方法通过RT-PCR方法检测U266多发性骨髓瘤细胞株和健康人外周血B淋巴细胞的Wntl/β-Catenin信号通路中β-catenin mRNA表达水平。用免疫磁珠法分离骨髓瘤细胞株中CD138-细胞,观察CD138-细胞在干细胞培养液中的生长状态,同时用RT-PCR方法检测CD138-、CD138+和U266细胞β-catenin mRNA表达水平。用β-catenin shRNA干扰CD138-细胞,观察CD138-细胞的生长状态,同时用RT-PCR和Western blot检测CD138-细胞干扰后β-catenin mRNA 和 β-catenin的蛋白表达水平。结果(1)U266细胞株中β-catenin 的 mRNA表达量是健康人群外周血B淋巴细胞的9.90倍。U266多发性骨髓瘤细胞株中的CD138+细胞占97.1%,CD138-细胞占2.9%。(2)用免疫磁珠法分离骨髓瘤细胞株中CD138-细胞,所得细胞中CD138-细胞纯度为71.6%。CD138-细胞在干细胞培养基中培养5-7天呈悬浮状球体生长。CD138-细胞中β-catenin mRNA的表达水平分别是U266细胞和CD138+细胞的2.99倍和2.61倍。(3)用β-catenin shRNA慢病毒干扰CD138-细胞后,细胞的成球率明显减少,球体的大小均明显减小,生长出现被抑制现象。被β-catenin shRNA慢病毒干扰后CD138-细胞中的β-catenin mRNA表达水平仅为对照组CD138-细胞的β-catenin mRNA表达水平16.0%; β-catenin蛋白表达水平仅为对照组CD138-细胞的48.0%。结论(1)U266多发性骨髓瘤细胞Wntl/β-catenin信号通路中存在β-catenin mRNA异常高表达。(2)从U266多发性骨髓瘤细胞中分离的CD138-细胞的Wntl/β-catenin信号通路中的β-catenin mRNA表达高于U266多发性骨髓瘤细胞和CD138+细胞。(3) β-catenin-shRNA干扰对CD138-细胞生长和增殖有一定影响;并可明显抑制β-catenin mRNA及其蛋白的表达,具有用于多发性骨髓瘤治疗的前景。