论文部分内容阅读
水稻生产是地球上最重要的经济活动之一,我国是世界上最大的稻米生产和消费国。随着生物与非生物因素胁迫的日益严重,水稻生产面临巨大的压力,利用基因工程技术培育新品种,是增加水稻单产、提高水稻总产的出路之一。由于大多数籼稻具有不良的组织培养特性和极低的转化效率,严重限制了转基因技术在籼稻育种上的应用,水稻转基因育种研究中急需转化效率高、农艺性状好的籼稻品种。本研究通过农杆菌介导法,Bar基因为筛选标记,对课题组培育的籼稻Kasalath改良品系进行遗传转化效率评价,以期筛选出遗传转化效率高的改良品系,并获得优良的抗除草剂转化事件。论文的主要结果如下：(1)利用农杆菌介导法转化Kasalath改良品系9K08-3、9K18-7、9K21-3、9K28-5、9K29-9和9K30-0及其亲本Kasalath、HD9802S,获得18株再生苗,其中PCR阳性再生苗有16株,9株来源于Kasalath、2株来源于9K18-7、1株来源于9K28-5、3株来源于9K29-9、1株来源于9K30-0。(2)对阳性再生苗外源基因的整合和表达进行了严谨的验证。16株PCR阳性再生苗的Southern分子杂交显示Bar基因已整合至水稻染色体上,共获得15个独立的转化事件,8株为单拷贝,8株为多拷贝(有2株为同一转化事件)；连续两代的除草剂抗性试验、PAT蛋白分析和PCR检测表明,Bar基因在转化事件中稳定遗传和表达。(3)用酶联免疫(ELISA)试剂盒对T1和T2代转基因植株中PAT蛋白相对含量进行了检测,BK-1、BK-3、BK-5、BK-8、BK-9、B9K-1、B9K-6和B9K-8等8个转化事件PAT蛋白相对含量高,均在25μg/g以上。(4)以亲本Kasalath和HD9802S为对照,Bar基因为筛选标记,初步评价了Kasalath改良品系9K08-3、9K18-7、9K21-3、9K28-5、9K29-9和9K30-0的基因转化效率。试验共获得15个独立转化事件,9K08-3、9K18-7、9K21-3、9K28-5.9K29-9和9K30-0的基因转化效率分别为0、0.65%、0、0.23%、0.40%和0.22%；初步结果表明Kasalath改良品系的基因转化效率和组织培养特性之间的相关性并不显著,改良品系9K18-7具有较高的基因转化效率。(5)筛选了几个农艺性状相对优良的单拷贝转化事件BK-1、B9K-1、B9K-6和B9K-8,确定了这些转化事件中外源基因的插入位点。