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大黄鱼（Larimichthys crocea）作为我国重要的海洋经济物种之一,由于常年过度的捕捞,天然资源遭受严重破坏,其渔业资源亟待补充。因此,研究大黄鱼生长相关的调控机制具有重要的实际意义。本论文主要基于哺乳动物细胞表达系统开发了大黄鱼神经肽Y（Neuropeptide Y;NPY）高活性表达技术,并对表达产物的活性进行了评测;同时以实验室成功构建的FLAG-LcNPY2R/7R（FLAG-Larimichthys crocea Neuropeptide Y2/Y7 Receptor）,LcNPY2R/7R-EGFP（Larimichthys crocea Neuropeptide Y2/Y7 Receptor-EGFP）融合表达载体为基础,对合成和分泌制备的多肽LcNPY激活LcNPY2R/7R后介导的信号转导机制进行了系统研究。通过在pcDNA3.1（+）真核表达载体中插入LcNPY成熟肽、LcNPY 18-36截断体多肽、六聚组氨酸连接成熟肽和六聚组氨酸连接18-36截断体多肽这四种重组插入片段,成功构建出能够表达大黄鱼NPY的真核表达系统。将固相合成的LcNPY作为对照,使用蛋白免疫印迹技术和对其内吞作用的研究对HEK293T细胞表达的四种多肽进行活性分析。结果表明pcDNA3.1-NPY重组表达载体表达产物具有高活性特征,表达多肽的活性浓度最高可达到合成多肽LcNPY 100nM的活性水平;并且四种大黄鱼NPY重组真核表达载体均可引起LcNPY2R内吞,说明已构建出的上述真核表达系统产生的多肽具有较高活性。研究结果显示LcNPY2R/7R能被LcNPY激活,LcNPY2R/7R被LcNPY激活后能抑制forskolin引起的cAMP的积累,说明LcNPY2R/7R激活后偶联了Gαi蛋白;另外,LcNPY2R/7R被激活后能够引起显著的钙流信号,并且Gαq抑制剂FR900359能够抑制LcNPY2R/7R引起的Ca2+流,钙离子螯合剂的数据说明胞内和胞外Ca2+均参与了胞内信号传递,说明了两种受体被激活后同时偶联Gαi和Gαq蛋白。研究结果还显示Lc NPY2R/7R被激活后均能显著介导ERK1/2磷酸化,且呈现出LcNPY配体浓度和时间梯度依赖性,活化水平同时受到胞内钙和胞外钙离子的调控。内吞是GPCR脱敏的重要方式,LcNPY2R/7R的内吞呈LcNPY处理时间和浓度梯度依赖性,且可被Y2受体抑制剂所抑制。综上所述,本论文通过构建重组真核表达系统成功表达出具有生物活性的大黄鱼NPY,表达产物有望通过进一步的生产工艺优化,形成低成本的活性肽生物制品,应用于大黄鱼的摄食生长等养殖产业,从而为大黄鱼种质资源保护、繁育提供良好的技术支持。本论文拓展了对大黄鱼NPY及其受体的信号转导机制的认识,对LcNPY2R和LcNPY7R介导的下游第二信使cAMP和Ca2+的产生、ERK1/2磷酸化路径以及受体的内吞等信号通路进行了阐述;为日后深入、全面的研究大黄鱼神经肽受体信号转导通路和生理作用提供了一定的理论参考。