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在奶牛业,脂肪肝的自然发病率普遍较高,给奶牛生产带来很大的经济损失,预防及治疗脂肪肝便成为了育种工作者的目标。有研究表明,menin是调节肝脏脂质代谢的关键因子,可以直接或者与其它因子互作间接的参与肝脏的脂质代谢。Men1(multiple endocrine neoplasia type 1)基因,是多发性内分泌肿瘤1型综合征的关键致病基因,其表达的蛋白便是menin,不仅可以与大量关键转录因子相互作用,也可与大量的细胞内信号通路因子相互作用,广泛参与机体的代谢调节。有研究表明,menin半合子缺失的小鼠表现出体重增加,激素水平增加,如胰岛素和胰高血糖素血清激素水平的增加,肝脏中的甘油三酯增加,脂肪发生变性,同时也表现出代谢相关基因的增加,如解偶联蛋白2(Ucp2),过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1(Pgc-1α)和葡萄糖激酶(GK)。本研究拟以Men1基因作为肝脏代谢重要候选基因,研究其在小鼠肝脏代谢过程中发挥的作用,尤其是在脂代谢、糖代谢、胰岛素应答、炎症反应过程中的调控作用。PI3K/Akt、AMPK和NF-κB信号通路是调节糖代谢、脂代谢、炎症反应的重要信号途径,研究Men1基因对其信号通路内因子的调控作用对于研究该基因对奶牛肝脏代谢的调控作用具有重要意义。因此,本研究以小鼠的正常肝脏细胞系NCTC-1469为模型,成功构建了pcDNA3.1-Myc-His-mMen1重组质粒,并瞬时转染使Men1基因过表达;应用RNAi的方法,转染细胞使Men1基因低表达,随后采用qRT-PCR技术,在mRNA水平上检测Men1基因的表达变化,并将RNA样品进行转录组测序,随后用胰岛素、葡萄糖处理小鼠肝细胞,验证并研究Men1对于脂质代谢、炎症反应的调节功能。研究结果表明:(1)构建的pcDNA3.1-Myc-His-mMen1重组质粒在NCTC-1469细胞内成功表达,并发现在转染24h后Men1基因在mRNA水平上的表达量极显著提高(P<0.01);NCTC-1469细胞转染siMEN-2,发现在转染48h后Men1基因mRNA水平上的表达量极显著降低(P<0.01)。(2)提取RNA样品进行转录组测序,Men1过表达导致32个差异表达基因上调,Men1低表达导致157个差异表达的基因变化,其中上调基因为51个(包含5个新基因),下调基因为106个(包含两个新基因),同时通过GO分析和KEGG分析,筛选到胰岛素相关信号通路、糖代谢、脂肪酸代谢通路、炎症通路等,同时还筛选到了一些互作蛋白。(3)在6μg/mL胰岛素、35mmol/L的葡萄糖分别处理8h、48h下,检测发现两者均可下调Men1基因的表达(P<0.01),表明Men1基因参与葡萄糖及胰岛素介导的脂质合成和炎症反应。随后检测转录组测序的数据中筛选的与脂代谢、糖代谢、胰岛素反应、炎症等相关的因子的mRNA水平的表达量,结果显示:添加葡萄糖及胰岛素可上调包括Pgc-1α、Srebp-1c、Fas、Acc1、及Akt在内的与脂质合成相关的基因在mRNA水平的表达。同时降低Ampk、Nf-κb、Il-1b、Tnf-α炎症通路基因的mRNA水平的表达。综上所述,Men1基因可经PI3K/Akt信号通路、AMPK信号通路和NF-κB信号通路调控小鼠肝细胞的脂肪代谢和炎症反应,证明menin是调节肝脏脂质代谢的关键因子,这为进一步研究Men1/menin在其他物种脂肪代谢中的调节功能奠定基础。