研究目的:设计颈型颈椎病动物实验并进行针刀干预,通过实验结果观察及数据分析,明确针刀干预对颈椎病兔颈部肌肉组织及椎间盘组织相关信号通路的影响。研究方法:将新西兰兔随机分为空白组、模型组与针刀组,采用自制兔盒并予寒湿刺激进行造模,造模结束后通过影像学检查及实验室检查判断造模成功与否。He染色法观察3次针刀干预后各组兔椎间盘组织形态学变化并通过免疫组织化学法观察各组IL-1的表达情况,Western Blot法观察各组p38MAPK表达情况。He染色法观察1次针刀干预后3d、6d及12d时各组兔肌肉组织形态学变化Masson染色法观察各组兔肌肉组织纤维化情况,并通过 RT-PCR 观察各组 CD68、CD163、CD206、MyoD、myogenin、COI 1mRNA 的表达情况,Western Blot法观察Myostain蛋白表达的情况。研究结果:1.X线结果显示:空白组未见颈椎生理弧度异常,椎间隙正常,未见椎体前后缘出现骨质增生;模型组出现颈椎弧度异常、为反弓状,C4/5椎间隙出现狭窄,部分椎体表现出骨质增生。2.MRI结果显示:失状面:空白组的椎间盘高度未见异常、结构均匀一致,髓核形态圆润呈亮白色,椎间隙未见狭窄,椎间盘无突出;模型组椎间盘高度减低,椎间隙狭窄,髓核形态不光整呈灰黑色,C6/7椎间盘向后方突出。横断面:空白组纤维环形态完整均匀,髓核与纤维环分界清晰。模型组纤维环形态不光整,部分出现破裂,髓核与信维环分界不清晰,结构不均匀,部分髓核向侧后方膨出。3.超声结果显示:超声影像学观察结果显示:短轴平面内,各组二维声像图:空白组肌肉为低回声,回声均匀,肌束膜、外膜的回声稍高;模型组肌肉厚度增加、肌肉回声增强且回声不均匀,肌束膜、肌外膜的回声较空白组明显增强,肌外膜部分回声连续性中断（红色箭头所示）。短轴平面内,彩色多普勒血流显像:空白组血流信号较少。模型组血流信号较空白组明显增多,回声不规则。4.He染色:实验一:在空白组中,肌细胞横切面均匀染色为粉红色,紧密地排列在一起,细胞形态规则且大小一致。半椭圆形的为细胞核,染色为紫蓝色,在肌细胞周围分布,未出现明显增生的细胞核或固缩的细胞核;肌细胞纵切面可见肌膜完好无损,无肿胀、炎症等变化。在模型组中,肌细胞横切面可见细胞不均匀染色,外形不规则规则且小大不等,可见大量的细胞核,出现圆形细胞核,存在炎症浸润,纤维化;纵切面（图6.d）可见肌纤维溶解、变性,连续性中断,大量空泡形成。椎间盘组织HE染色结果显示,空白组的椎间盘组织形态完整,结构清楚,髓核呈椭圆形居中,纤维环排列规整与髓核分界清晰,软骨终板结构规整。模型组椎间盘内髓核消失,被纤维组织替代,纤维环较空白组增厚、形态粗糙,排列不规整,软骨终板厚度降低。实验二:结果显示,空白组:椎间盘外形光整,结构清晰,髓核呈椭圆形居中。纤维环排列规整,与髓核分界清晰,软骨终板外形光整,结构清晰。模型组:髓核消失,被纤维组织替代,纤维环较空白组增厚、形态粗糙,排列不规整,软骨终板厚度降低。针刀组:髓核体积较空白组减小,纤维环排列尚规整,形态略粗糙,与髓核界限清晰,软骨终板厚度降低。实验三:空白组各组（A1、A2、A3）骨骼肌纤维染色均匀呈粉红色,排列整齐,呈大小一致的多边形,边缘清晰,细胞核呈蓝紫色均匀地分布于肌纤维边缘。模型组各组（B1、B2、B3）肌纤维染色不均匀,部分区域胞质染色加深,排列紊乱,呈大小不一的不规则形态,部分区域肌纤维断裂,边缘模糊,细胞间隙增大,出现肌纤维萎缩,存在大量深染的细胞核,可见炎性细胞浸润与纤维组织形成。B2、B3与B1相比,炎性细胞浸润与肌纤维萎缩未见明显减轻。干预后3d,针刀组（C1）肌纤染色不均匀,排列紊乱,呈明显维断裂扭曲,细胞间隙增大,出现肌纤维萎缩,可见大量炎性细胞浸润。干预后6d,针刀组（C2）肌纤维结构不完整,肌纤维扭曲变形、肿胀、断裂,仍存在大量炎性细胞浸润,与C1相比未见明显改善,但与同期模型组（B2）相比,炎性细胞浸润略有减轻。干预后12d,针刀组（C3）肌纤维结构明显好转,肌纤维扭曲变形及肿胀显著减轻,仅见少量炎性细胞浸润,部分肌纤维排列整齐,边界清晰,细胞核由中央向细胞边缘移动,表明新生肌纤维逐渐成熟,但细胞间隙仍然较大,存在肌纤维萎缩。2.Massson染色:实验一:空白组多裂肌仅见少量蓝染纤维化区域,模型组则存在大量蓝色深染部分,包围在肌纤维周围,严重处可见胶原纤维覆盖在受损肌纤维的表面。实验三:空白组各组（A1、A2、A3）多裂肌几乎无蓝染区域,未发生骨骼肌纤维化;模型组各组（B1、B2、B3）均存在大量蓝色胶原纤维包围在肌纤维周围,甚至覆盖在肌纤维表面。针刀组各组（C1、C2、C3）同样存在蓝色胶原纤维包围、覆盖,但蓝色胶原面积随着时间逐渐减少。3.免疫组化显示:实验二:IL-1免疫组织化学染色法阳性产物呈棕褐色或棕黄色,定位于基质与胞浆中。与空白组相比,模型组IL-1表达显著增多（P＜0.01）;与模型组相比,针刀组IL-1表达明显减少（P＜0.01）。4.RT-PCR显示:实验一:使用RT-PCR法检测肌肉组织中CD68、CD63与CD206mRNA表达情况,结果显示:相比于空白组,模型组肌肉组织中CD68与CD163、CD206mRNA表达水平显著升高（P＜0.01）。实验三:在所有时间点,模型组CD68、CD206、CD163、MyoD、肌生成素、COI1 mRNA的表达均高于对照组（P＜0.01）。与模型组相比,针刀组第 12 天 MyoD、MyogeninmRNA 的表达水平显著降低（##P＜0.01,#P＜0.05）,而 COI 1、CD68、CD206和CD163 mRNA在所有时间点均显著降低（P＜0.01）。4.Western Blot结果显示:实验二:与空白组相比,模型组椎间盘组织p38MAPK蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）;与模型组相比,针刀组椎间盘组织p38MAPK蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）。实验三:与空白组相比,模型组第3、6、12天肌生长抑制素蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）。同时,针刀组在第3、6、12天的肌生长抑制素蛋白表达水平均显著低于模型组（P＜0.01）,两组均呈下降趋势（▲P＜0.05,▲▲P＜0.01,△△P＜0.01）。结论:1.采用该固定盒制备颈型颈椎病模型,迫使新西兰兔长时间维持低头位并予以寒湿刺激,可使新西兰兔出现颈椎病表现,与颈椎病发病的病理过程相符。2.针刀干预可抑制p38MAPK及椎间盘退变病程中主要炎证细胞IL-1的表达,减轻炎症反应,缓解细胞外基质合成与分解代谢不平衡,减缓椎间盘退变的进程,从而维持颈椎静态稳定,可能是针刀治疗颈型颈椎病潜在的作用机制之一。3.针刀通过调控巨噬细胞、肌卫星细胞及相关因子的表达,促进颈椎病兔颈椎肌组织的修复和再生并抑制骨骼肌纤维化,可能是针刀针刀治疗颈型颈椎病的机制之一。4.针刀治疗颈型颈椎病是由于针刀对病灶局部的肌肉组织、结缔组织的机械性损伤效应加重了局部肌肉组织的损伤与炎性反应,激活自身免疫反应,促进组织修复,恢复颈椎外源性平衡,减轻椎间盘、椎体所受异常应力,并通过力学生物学信号通路调控椎间盘组织中相关促炎及炎性因子表达,从而延缓椎间盘退变,控制颈型颈椎病的发生发展。