【摘 要】
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[目的]建立有效的体外培养扩增人CD4+CD25+Treg细胞的体系,为临床输注供者来源的CD4+CD25+细胞抑制急性移植物抗宿主病(aucte graft versus host disease ,aGVHD)提供实验基
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[目的]建立有效的体外培养扩增人CD4+CD25+Treg细胞的体系,为临床输注供者来源的CD4+CD25+细胞抑制急性移植物抗宿主病(aucte graft versus host disease ,aGVHD)提供实验基础。[方法]用免疫磁珠分选法从健康人外周血淋巴细胞中得到CD4+T细胞,CD4+CD25-T细胞,CD4+CD25+ Treg细胞。分别进行长期培养、扩增;流式分析其表型及FOXP3表达,MTT法检测体外扩增的CD4+ CD25+ Treg对自体和异体的CD4+T细胞增殖的抑制作用。[结果]经过3周培养,三组细胞均有明显的扩增。磁珠分选后的CD4+CD25+ Treg细胞的扩增倍数为20±8,细胞纯度89.28%±2.43%下降到76.36%±2.38%。CD4+CD25-T细胞组扩增迅速,倍数为110±21倍,并且CD4+CD25+Treg细胞的比例由培养前0.55%±0.27%增加到53.73%±3.81%。CD4+T细胞组扩增倍数为89±8倍,并且CD4+CD25+Treg细胞的比例由10.63%±3.87%增加到70.93%±1.71%。体外抑制实验显示体外扩增的CD4+CD25+T细胞对自体和异体的CD4+T细胞增殖均有明显的抑制作用,并且随着效靶比浓度的降低而降低。而且其各浓度梯度的抑制作用在自体和异体之间无明显的差异。[结论]我们在体外成功扩增了CD4+CD25+Treg细胞,并且具有免疫抑制功能,其中CD4+T细胞组扩增倍数大,细胞数量多,细胞纯度有很大提高,方法简便,有望应用于临床试验。
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