胰腺癌(pancreatic cancer，PC)是消化系统较常见、恶性程度较高的肿瘤之一。胰腺癌发病隐匿，早期在临床上缺乏特异表现，恶性程度高，极易出现早期局部侵犯和转移，在确诊时绝大多数的病人已存在局部或广泛转移，不能行手术切除，5年生存率<6％。因此提高胰腺癌的早期诊断率，是实现早期治疗、改善患者生存率和死亡率的关键。目前临床上尚缺乏有效的非创伤性早期筛查手段，因此迫切需要研究和揭示胰腺癌的分子发病机制，为其早期诊断及优化治疗提供新的分子靶点。Hedgehog（Hh）信号通路异常激活在胰腺癌中是普遍存在的，与其发生、发展密切相关。研究报道，Hh通路成员Shh和Gli1蛋白在胰腺癌组织中呈低到中度表达；Shh和Gli1蛋白的表达与一些临床病理特征存在显著的相关性。Hh信号通路负性调控因子Sufu蛋白在胰腺癌组织为阳性表达，而癌旁胰腺组织及正常胰腺组织中均未见表达。丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK)家族成员之一TGF-β激活性激酶1(TAK1)是炎症免疫、应激反应及肿瘤等过程中许多信号转导连锁反应的关键调控因子，近年来，文献报道TAK1可通过多种形式诱导NF-ΚB的激活。而NF-ΚB的直接转录靶点之一便是Hh通路的配体Shh，NF-ΚB的激活与胰腺癌中Hh通路的活化有关。由此我们提出假设，在胰腺癌进展过程中，TAK1也发挥着作用，而且可能与Hh通路之间可能存在相互协调。基于上述研究现状，本实验通过检测Hh信号通路主要成员（Shh、Gli1、Sufu）和TAK1及其活化形式PTAK1在胰腺癌中的表达，分析两条途径与临床病理参数的相关性，深入研究其在胰腺癌预后中的作用。本研究包括两个部分内容，分述如下。一、人胰腺癌组织中Hh信号通路主要成员（Shh、Gli1、Sufu）和TAK1及其活化形式PTAK1表达与临床病理特征的相关性研究目的：检测在胰腺癌组织和相应癌旁组织中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1的表达情况，分析胰腺癌组织中5种蛋白的表达与胰腺癌患者临床病理特征的相关性。方法：收集2005年5月至2012年9月长海医院手术切除的169例胰腺癌患者的胰腺癌组织和配对的35例癌旁组织，同时收集患者临床资料。通过查阅病历和电话随访获得以下内容：人口学特征、病史、手术记录、病理报告结果等。所有病例均经病理确诊为胰腺导管腺癌。采用Envision（两步法）免疫组织化学法检测胰腺癌和癌旁组织中5种蛋白的表达。通过卡方检验或Fisher精确概率法与多因素logistic回归分析法，明确5种蛋白的表达水平与TNM分期、淋巴结转移及远处转移等临床病理特征的关系。结果：Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1在胰腺导管腺癌组织中高表达者分别为105例（70%）、136例（84.5%）、46例（30.1%）、126例（80.3%）与130例（81.3%）。1、胰腺癌中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表达量的相关性胰腺癌组织中Shh、Sufu表达量呈正相关(P<0.05）。胰腺癌组织中Gli1表达量分别与Sufu、TAK1表达量呈正相关（P<0.05）。胰腺癌组织中Sufu表达量分别与Shh、Gli1、TAK1表达量呈正相关（P<0.05）。胰腺癌组织中TAK1表达量分别Gli1、Sufu、PTAK1表达量呈正相关(P<0.05）。2、Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表达与临床病理特征的关系肿瘤组织中Shh高表达与淋巴结转移、远处转移、TNM分期明显相关（P<0.05）。肿瘤组织中Gli1高表达与肿瘤局部浸润、分化程度显著相关（P<0.05）。肿瘤组织中Sufu高表达与淋巴结转移显著相关（P<0.05）。肿瘤组织中TAK1高表达与肿瘤部位相关（P<0.05）。(P)TAK1表达与上述特征无明显相关性。3、Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表达与TNM分期的关系单因素分析结果显示，TNM分期分别与Shh表达、Gli1表达、Sufu表达、肿瘤部位、肿瘤分化程度潜在相关（P<0.25）。单独对Ⅰ期、Ⅱ期的病人进行了分析，得出以下结果：单因素分析结果显示，TNM分期分别与Shh表达、Gli1表达、Sufu表达、TAK1表达、PTAK1表达、肿瘤部位、年龄潜在相关（P<0.25）。多因素分析结果显示，Shh高表达、胰头部胰腺癌与高等级TNM分期显著相关（P<0.05）。4、Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表达与淋巴结转移的关系单因素分析结果显示，淋巴结转移分别与年龄、肿瘤部位、局部浸润、远处转移、Shh表达、Sufu表达、PTAK1表达潜在相关（P<0.25）。5、胰腺癌组织5种蛋白的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.001)。多因素分析结果显示，Shh高表达、远处转移与淋巴结转移明显相关（P<0.05）。结论：胰腺癌组织中TAK1表达量分别与Gli1、Sufu表达呈正相关，提示两条途径可能存在相互作用。胰腺癌组织Shh高表达与淋巴结转移、远处转移、TNM分期明显相关，Gli1高表达与肿瘤局部浸润、分化程度显著相关；Sufu高表达与淋巴结转移显著相关； Shh高表达是高等级TNM分期（单独对Ⅰ期、Ⅱ期的病人进行分析）及淋巴结转移的独立预测因子；(P)TAK1表达与上述特征无明显相关性；胰腺癌组织上述蛋白的表达水平明显高于癌旁组织，提示Hh信号通路在胰腺癌发生中发挥作用。二、人胰腺癌组织中Hh信号通路主要成员(Shh、Glil、Sufu)和TAK1及其活化形式PTAK1表达与胰腺癌预后的相关性研究目的：分析胰腺癌组织中Shh、Gli1、Sufu、TAK1及PTAK1表达水平与胰腺癌患者预后的相关性。方法：收集2005年5月至2012年9月长海医院行手术治疗的169例胰腺癌患者的病例。所有患者术前均未行化疗、放疗。调查内容包括人口学特征、个人生活习惯、病史、病理报告、实验室检查结果、总生存期等。通过查阅病历、电话随访获得上述资料。生存期随访截止时间为2013年2月6日。采用Kaplan-Meier法及Cox回归分析法,评价上述蛋白在癌组织中的表达水平及这些蛋白的组合对患者预后的影响。结果：本研究共随访胰腺导管腺癌患者169例,年龄中位数为61岁(年龄范围26-82岁),其中男性占60.9%。随访时间中位数为11个月(时间范围2.03-53.77个月)。排除术后一个月内死亡的病例后,共166例患者纳入生存分析。患者中位总生存时间(95%可信区间)为11(9.45-12.01)个月。单因素分析结果显示,患者总生存期分别与性别、远处转移、TNM分期、CA.99、Glil、Sufu、TAK1、PTAK1、分化程度和淋巴结转移潜在相关(P<0.25)。Gli1、Sufu、 TAK1、PTAK1低表达及远处转移、高等级TNM分期、血CA.99高均与患者总生存期下降显著相关(P<0.05)。多因素分析结果表明,PTAK1低表达、CA199>1000U/ml、肿瘤分化程度低均为总生存时间下降的独立预测因子(P<0.05)。对蛋白组合变量的生存分析显示：Glilhigh/Sufuhigh组较Glilhigh/Sufulow组、Glilhigh/TAK1high组较Glilhigh/TAK1low组生存期长(P<0.05)。Glilhigh/PTAK1组较Gil1high/PTAK1low及PTAK1high/Glillow组生存期长(P<0.05)。Sufuhigh/TAK1high组较Sufuhigh/TAKlow及TAK1high/Sufulow组生存期长(P<0.05)单因素生存分析显示：组合变量Gli1high/Sufuhigh、Gli1high/TAK1high Gli1hig/PTAK1high、Sufuhigh/TAKlhigh、Sufuhigh/PTAKlhigh、Gli1high/Sufuhigh/TAK1high与生存期较长显著相关(P<0.05)。多因素生存分析发现Gli1high/PTAK1high、 Gli1high/Sufuhigh/TAK1high是预后好的独立预测因子(P<0.05)。结论：胰腺导管腺癌组织Glil、Sufu、TAK1、PTAK1低表达与术后患者生存期下降显著相关；PTAK1低表达为总生存时间下降的独立预测因子,提示两条途径与胰腺癌预后相关。Glil、Sufu与(P)TAK1高表达组合变量Gli1high/Sufuhigh、 Gli1high/TAK1high、Gli1high/PTAK1high、Sufuhigh/TAKlhigh、Sufuhigh/PTAKlhigh、 Gli1high/Sufuhigh/TAK1high与预后较好明显相关：提示TAK与Hh信号通路两条途径在胰腺癌发生发展中可能存在相互影响,为进一步研究提供理论支持。