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蜂胶是蜜蜂从植物幼芽、树皮与树干裂缝上采集树脂,并混入其上颚腺分泌物和蜂蜡加工而成的具芳香气味的胶状固体物。由于其广泛的生物活性,目前蜂胶已经被广泛应用于食品、保健品以及化妆品等行业中。然而,由于蜂胶的生产受蜂种、采胶方式以及胶源等多个因素的影响,产量相对较低,难以满足蜂产品市场日益增长的需求量。 在我国,蜂胶的主要植物来源以杨属(Populus)以及其杂交属为主。由于杨属型蜂胶与杨树芽化学组成的高度相似性,一些不法商贩利用杨树芽熬制杨树胶冒充蜂胶的现象时有发生。杨树胶在颜色、气味、形状上都与蜂胶十分相似,按照我国现有的蜂胶质量标准无法将其区分开来,因此蜂胶掺杂使假现象愈演愈烈。建立有效的杨属型蜂胶真伪鉴别以及质量评价方法,进一步改进和完善蜂胶质量标准,非常必要。 为了解决上述问题,本研究以杨属型蜂胶和杨树胶为研究对象,利用分光光度法、红外光谱、液相色谱、质谱、色谱联用、核磁共振等不同色谱光谱技术对杨树胶中特征性化合物A进行了鉴定,从植物源和蜜蜂双源角度进行深入分析,探究其在蜜蜂加工蜂胶过程中的转化机理,并利用高效液相色谱技术建立简便、快捷、准确的杨属型蜂胶与杨树胶的检测方法。在此基础上,本研究筛选杨属型蜂胶中含量高、生物活性优越的特征性成分,利用高效液相色谱技术,建立杨属型蜂胶的特征性指纹图谱,并对特征活性成分进行定量分析。具体研究结果如下: 1.杨树芽中特征性化合物A的化学名称为邻苯二酚,又称儿茶酚,其分子式为C6H6O2。 2.首次在蜂胶中检测到了多酚氧化酶的活性,并且证明了蜂胶中的多酚氧化酶来源于其胶源植物,并非蜜蜂自身腺体所分泌。该酶天然状态下处于未激活状态,仅在蜜蜂采集加工蜂胶时,破坏植物组织后才能将该酶激活,从而使杨树芽中的邻苯二酚化合物氧化为邻苯二醌,消失于蜂胶中。 3.运用高效液相色谱技术,建立了一种以邻苯二酚作为指标的蜂胶与杨树胶的鉴别方法。本研究以不同地理来源的蜂胶与杨树胶为研究对象,在所检测的杨树胶中均检测到了邻苯二酚,其含量范围为0.052~0.132 mg/g,而在杨属型、滔神菊属型、桉树型蜂胶中却未检测到该化合物。因此,该方法不仅可以应用于杨属型蜂胶、酒神菊属型蜂胶、桉树型蜂胶与杨树胶的鉴别中;而且还能够有效地鉴别出掺入5%以上杨树胶的蜂胶样品。 4.筛选杨属型蜂胶中含量较高、生物活性较强的标志性成分,运用高效液相色谱技术建立杨属型蜂胶的特征性指纹图谱,并对不同地理来源的杨属型蜂胶以及杨树胶中标志性成分进行定量分析。研究发现,来源于中国的杨属型蜂胶中均含有咖啡酸、阿魏酸、p-香豆酸、肉桂酸、3,4-二甲氧基肉桂酸、高良姜素、柯因、松属素、短叶松素、3-O-乙酰基短叶松素、异阿魏酸以及咖啡酸苯乙酯这12种化合物,其中高良姜素、柯因、松属素、短叶松素以及3-O-乙酰基短叶松素含量相对较高,而杨树胶中仅含有其中的9种,咖啡酸、阿魏酸以及p-香豆酸均未在杨树胶中检出。同时在所检测的蜂胶样本中均未发现芦丁以及杨梅酮。因此,该方法的建立不仅可以有效地将杨属型蜂胶与杨树胶区分开来,还能够对添加杨属以及非杨属植物源物质的掺假行为予以鉴别。