【摘 要】
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目的 对比研究波动性高浓度胰岛素与恒定性高浓度胰岛素对体外培养的人脐静脉内皮细胞的凋亡及一氧化氮(NO)分泌的影响，从而探究波动性高浓度胰岛素血症在糖尿病动脉粥样硬化
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目的 对比研究波动性高浓度胰岛素与恒定性高浓度胰岛素对体外培养的人脐静脉内皮细胞的凋亡及一氧化氮(NO)分泌的影响，从而探究波动性高浓度胰岛素血症在糖尿病动脉粥样硬化形成中的致病机制。 方法 采用体外培养的人脐静脉内皮细胞为对象，研究波动性高胰岛素对血管内皮细胞的凋亡及NO分泌的影响。实验分为4组，即对照组(不含胰岛素)、正常浓度胰岛素组(含胰岛素1nmol／L)、恒定性高胰岛素组(含胰岛素100nmol／L)与波动性高胰岛素组(含胰岛素1nmol／L及含胰岛素100nmol／L两种条件培养液，每8小时轮换一次)，每间隔8小时更换新鲜条件培养液一次，一共作用72小时。应用AO-EB染色法与流式细胞仪检测内皮细胞凋亡；应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮细胞eNOS基因mRNA转录水平，Western immunoblotting及免疫细胞化学法检测内皮细胞eNOS蛋白表达，硝酸还原酶法检测内皮细胞培养液上清中的NO的含量。 结果： 1、胰岛素对内皮细胞凋亡的影响 1．1 经不同浓度的胰岛素作用72小时后，AO-EB检测结果显示：正常浓度胰岛素组的内皮细胞凋亡细胞数明显下降，为对照组的81％(p＜0.001)，而恒定性高胰岛素组与波动性高胰岛素组的内皮细胞凋亡细胞数明显上升，分别为对照组的1.53倍(p＜0.001)与1.75倍(p＜0.001)，正常浓度胰岛素组的1.88倍(p＜0.001)与2.15倍(p＜0.001)；且波动性高胰岛素组内皮细胞凋亡细胞数显著高于恒定性高胰岛素组(p＜0.001)。 1．2 经不同浓度的胰岛素作用72小时后，流式细胞仪检测结果显示：正常浓度胰
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