半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gunther)是我国近海底层的大型名贵经济鱼类。本实验采用分子生物学、组织学、免疫组织化学和激素放射免疫测定方法,综合分析了促性腺激素受体(FSHR和LHR)在半滑舌鳎繁殖周期中的功能作用,所得结果与结论如下：1.半滑舌鳎促滤泡激素受体(FSHR)基因的克隆和表达本实验克隆了半滑舌鳎促滤泡激素受体(FSHR)基因cDNA的全长序列序列(3105bp),编码704个氨基酸,含有典型的跨膜螺旋结构区域(TM helix),属于糖蛋白激素受体(GHR)家族。组织表达分析表明,FSHR基因表达广泛,除在性腺中大量表达外,其他非性腺组织也有表达,尤其以脾、肾、头肾表达最为强烈。通过RT-PCR方法首次对FSHR mRNA在雌性半滑舌鳎的卵巢和脑2种组织；雄性半滑舌鳎的精巢、脑和脾3种组织中的表达进行了周年变化分析。结果显示,FSHR mRNA在上述5种组织中的表达均呈周期性变化。通过与血浆中E2含量、T含量和性腺发育GSI指数综合分析,探讨了FSHR在半滑舌鳎繁殖周期中的生理作用。2.半滑舌鳎促黄体激素受体(LHR)基因的表达分析采用巢式RT-PCR法克隆了半滑舌鳎促黄体激素受体(LHR)基因部分序列,该基因片段长度为614bp,编码204个氨基酸,含有典型的跨膜螺旋结构区域(TM helix),属于糖蛋白激素受体(GHR)家族。组织表达分析表明,LHR基因在半滑舌鳎的卵巢、精巢、肝脏、胃、肠、鳃、心、脾、肾、头肾和脑中均有表达,表达量有所不同,以脾和肾中表达量最丰富。通过RT-PCR方法首次对LHR mRNA在雌性半滑舌鳎的卵巢、脑、脾和肾4种组织；雄性半滑舌鳎的精巢和脾2种组织中的表达进行了周年变化分析。结果显示,FSHR mRNA在上述6种组织中的表达均呈周期性变化。通过结合性腺发育GSI指数和FSHR的基因表达特点,分析了LHR在半滑舌鳎繁殖周期中的生理作用。3.半滑舌鳎性腺促性腺激素受体的免疫组织化学研究3.1促滤泡激素受体(FSHR)在半滑舌鳎性腺中的免疫组织化学定位FSHR在Ⅱ时相卵母细胞的滤泡膜中有较弱的的分布；随着卵母细胞的发育,阳性反应越来越强烈,在Ⅳ时相和V时相卵母细胞的胞质和滤泡层中都有FSHR阳性反应,而且Ⅴ时相卵母细胞的颗粒细胞层阳性反应比膜细胞层强。到了Ⅵ时相卵母细胞时,滤泡层中反应微弱,胞质阳性反应强烈。在精巢的各个发育阶段中,FSHR在精原细胞、精母细胞、精子细胞及精小叶间质处均呈免疫阳性反应,在V期精巢时间质细胞反应最强烈；而在发育各期中的精原细胞核仁、精母细胞核及精子均呈免疫阴性反应。FSHR在半滑舌鳎卵巢和精巢中免疫组化阳性反应的强弱变化与FSHR基因在卵巢和精巢中表达变化模式一致,通过以上结果表明,半滑舌鳎FSRH主要在卵母细胞最后成熟和排精时起主要作用。3.2促黄体激素受体(LHR)在半滑舌鳎性腺中的免疫组织化学定位LHR在Ⅱ时相卵母细胞滤泡膜有较弱表达,在Ⅲ时相卵母细胞的滤泡层和胞质中阳性反应强烈,随着卵母细胞的发育FSHR阳性反应逐渐减弱,在V时相卵母细胞时只有滤泡层的膜细胞层检测到FSHR阳性反应,Ⅵ期卵巢中卵母细胞的滤泡层有较弱阳性反应。在各个发育阶段精巢的精原细胞、精母细胞、精子细胞和细胞间质有不同程度的LHR免疫阳性反应,在V期精巢的间质处阳性反应最强烈。LHR在半滑舌鳎卵巢和精巢中免疫组化阳性反应的强弱变化与LHR基因在卵巢和精巢中表达变化模式一致,通过以上结果表明,半滑舌鳎LHR主要在卵黄发生和排精时起重要作用。