微丝动态调控植物细胞顶端生长以及AtSNAP33蛋白在拟南芥根毛细胞中的分布与作用

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根毛顶端肌动蛋白的分布还存在一定的争议。虽然钙离子梯度和微丝动态的相关性是植物顶端生长研究的重点,但是很少有证据表明在根毛的顶端生长中这二者是直接相关的。 我们用TRITC-pha,lloidin标记微丝,FITC-DNase Ⅰ标记单体肌动蛋白,在激光共聚焦显微镜下观察根毛细胞内肌动蛋白的分布。研究发现根毛顶端5—10μm的区域内缺乏粗的微丝束,只有从粗微丝束中延伸出的细丝。同时观察发现,旺盛生长的根毛细胞顶端存在单体肌动蛋白浓度梯度,成熟根毛内单体肌动蛋白梯度消失,同时粗微丝束延伸到顶端。用钙离子的特异螯和剂BAPTlA-AM处理根毛细胞后其顶端钙离子梯度消失,同时也引起顶端单体肌动蛋白梯度的消失,导致微丝延伸到根毛顶端。根据以上结果我们认为,根毛细胞顶端单体肌动蛋白浓度梯度的存在对于其生长可能是必须的,同时单体肌动蛋白浓度梯度的维持需要顶端的高钙离子浓度存在。 有关研究表明,微丝动态影响花粉管的顶端生长,囊泡和质膜融合推动花粉管生长。我们利用微丝稳定剂和解聚剂干扰花粉管内微丝的动态;同时利用活体囊泡指示剂FM1-43,FM4-64观察花粉管内囊泡的动态分布。观察发现,扰乱花粉管顶端微丝动态导致囊泡在其顶端的分布发生变化;无论是影响微丝解聚还是影响微丝聚合,花粉管顶端贴近质膜区域的囊泡都发生相对缺失,同时生长受到抑制。为了进一步说明微丝动态对花粉管顶端囊泡分布的影响,我们借助ABD2-GFP表达的烟草花粉管显示微丝,FM4-64显示囊泡的分布,利用荧光强度定量分析花粉管顶端微丝动态与囊泡动态的相关性。分析发现花粉管顶端质膜下囊泡的多少与花粉管生长速率高低相关,顶端微丝解聚聚合与其顶端囊泡的多少相关。综上,我们认为囊泡在花粉管顶端的分布与顶端生长密切相关;微丝对花粉管生长的作用可能不仅仅单纯的是具有运输囊泡的功能,而且顶端微丝可能通过聚合和解聚的动态精密调节着花粉管顶端囊泡的动态分布与分泌。 真核细胞的膜融合都是由SNARE蛋白介导的。拟南芥中已鉴定出的SNARE有68种。芯片结果显示,拟南芥不同器官及生长阶段SNARE蛋白的表达存在差异。我们推测这68种SNARE参与了不同生长阶段以及不同组织器官的细胞内膜融合过程。根毛细胞作为一类特殊的顶端生长细胞,介导其顶端膜融合的SNARE复合体目前还未见报道。我们借助拟南芥SNAP33的特异抗体以及SNAP33-GFP转基因植株发现SNAP33在根毛细胞中的分布主要集中在其顶端分泌活动旺盛的位置;对SNAP33超表达植株表型分析发现超表达植株的根毛生长速度快于野生型,超表达植株的根毛也多于野生型,同时超表达植株与野生型相比较表现为对干旱不敏感。因此,我们认为SNAP33可能参与了拟南芥根毛细胞顶端生长的膜融合过程。
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