花臭蛙线粒体全序列分析及基于线粒体基因组探讨蛙科系统发生关系

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蛙科动物(Ranidae)是两栖动物无尾目(Anura)下新蛙亚目(Neobatrachia)中一个物种数量繁多的大科。对于蛙科的系统关系存在争议,蛙科内属的关系也未得到很好的解决。这是因为大部分研究采取的分子遗传标记数据较少,所以系统发生关系差异明显。本研究测得了花臭蛙(Odorrana schmackeri)的线粒体基因组全序列后,联合NCBI网站发布的现有的蛙科动物的线粒体全序列构建系统发生树,以期为蛙科的系统发生关系提供更多证据。  本研究根据Oligo7.0软件设计出能扩增出花臭蛙(Odorrana schmackeri)线粒体全序列的17对引物,然后采用PCR及LA-PCR方法扩增序列并进行测序。得出花臭蛙线粒体基因组全序列长为18610bp,包含36个基因,分别为2个rRNAs基因、13个蛋白编码基因、21个tRNAs(缺少tRNA-His),还有一个控制区外加几个非编码空隙。通过跟石川臭蛙控制区对比,花臭蛙控制区终止相关序列区(TAS)的序列为:TATACTATGTATAATCATCATTAATCTATATAGTT;保守区(CSB):三个短的序列框CSB-1 (TAAATGAATGCTCGAATGACATA),CSB-2 (TACCCCCCCCCTTTACCCCC),CSB-3 (CCTTAAAACCCCCCCCGA);没有识别到中央保守区(CD)。在花臭蛙控制区5和3两端分别找出长为468 bp、195 bp的两个串联重复序列VNTRs1和VNTRs2,5端的VNTRs1为62 bp,重复6次:5-ATATAGATATAGGTACTATATCATACTATGTATAATCACCATTAATCTATATGGTTACATTC-3,而在3端发现了15 bp长的重复13次的VNTRs2:5-TAGATATACCTATAA-3。花臭蛙线粒体基因排列方式跟新蛙亚目的基本一致,除了花臭蛙的线粒体基因组中缺失tRNA His,推测tRNA His在线粒体中的消失是直接丢失或是转移到了细胞核中。  本文选择了15个属共70种蛙科动物,外加蟾蜍科的两种蟾蜍隐耳蟾蜍(Bufo cryptotympanicus)和史氏蟾蜍(Bufo stejnegeri)作外群,构建了基于线粒体全序列的系统发生树。结果显示:系统发生树高度支持将文中选取的70种蛙类动物分为两个进化枝:分支A和分支B。分支A包括倭蛙属、棘蛙属、大头蛙属、虎纹蛙属(Hoplobatrachus)、陆蛙属(Fejervarya)和水栖蛙属(Euphlyctis)6个属。分支B由湍蛙属(Amolops)、侧褶蛙属(Pelophylax)、拇棘蛙属(Babina)、臭蛙属(Odorrana)、蛙属(Rana)、腺蛙属(Glandirana)、水蛙属(Hylarana)七个属组成。所以分支A和分支B分别代表叉舌蛙亚科和蛙亚科。另外,跟大部分研究结果不同的是,圆舌浮蛙(Occidozyga martensii)聚到了叉舌蛙亚科和蛙亚科之外。从系统发生关系看,支持将叉舌蛙亚科和蛙亚科两个亚科升级为两个科:叉舌蛙科和蛙科。  新蛙亚目有区别于典型脊椎动物的特定线粒体基因排列方式,但新蛙亚目中常常发生线粒体基因重排现象。在选取的物种中,重排的方式主要有:控制区下游的LTPF基因簇、NDII和COI之间的WANCY基因簇、tRNA His和ND5的易位及tRNA Met和控制区CR的复制等。线粒体基因重排跟系统发生树分类基本一致。进化枝B中虎纹蛙属和六趾蛙都复制了另一个CR,并且ND5基因位移到了复制的CR区下游,从而拥有两个控制区;而在系统发生树中,虎纹蛙属和六趾蛙聚合在一起,说明基因重排能反映出系统关系。所以在系统发生关系研究中,可以将线粒体基因的重排作为探究系统发生的一个有力的分子标记。
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