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目的龙血竭是我国传统名贵中药,是百合科龙血树属植物剑叶龙血树Dracaenacochinchinensis(Lour.) S. C. Chen的含脂木材经提取得到的树脂,在治疗冠心病、脑梗塞、心肌缺血、脑损伤等方面,有显著的疗效[1-2],然而龙血竭溶解度低导致其吸收差,吸收是药物发挥疗效的关键,因此严重限制了其临床应用,本公司已将其制备成包合物,期望增加其溶出度,改善吸收,从而提高生物利用度。本课题在制剂研究基础上,利用体外溶出方法对龙血竭及其包合物的溶出速度及程度进行评价,在此基础上,从细胞、器官及整体水平对其吸收特性及吸收机理进行系统研究,为改善龙血竭生物利用度,开发口服制剂提供依据。方法1. 体外溶出研究 建立一个相对具有区分力的溶出方法,采用高效液相色谱(High performance liquid chromatography,HPLC)法测定龙血素 A 含量,以累积溶出度为评价指标,比较龙血竭及其包合物的溶出速度及程度。2. Caco-2 细胞转运研究 建立 Caco-2 细胞(Human colon androcarcinoma celllines)模型,采用 HPLC 法测定龙血素 A 含量,计算表观渗透系数(Apparentpermeability coefficient,Papp)及两侧转运比值(Pertechnetate thyroid uptake ratio,Pratio),以评价龙血竭及其包合物在 Caco-2 细胞中吸收情况及吸收机理。3. 大鼠在体肠单向灌流研究 建立在体肠单向灌流模型,采用 HPLC 法测定龙血素 A 及龙血素 B 含量,计算吸收速率常数(Absorption rate constant,Ka)和表观渗透系数(Papp),以评价龙血竭及其包合物在小肠中吸收情况及吸收机理。4. 大鼠药代动力学及组织分布研究 分别给予两组大鼠灌等剂量的龙血竭及其包 合 物 , 在 不 同 时 间 点 采 血 , 采 用 液 质 联 用 ( Liquid chromatograph-massspectrometer,HPLC-MS/MS)法测定龙血素 A 及龙血素 B 含量, DAS(Drug andstatistics)软件处理药代数据,计算两组大鼠的主要药动学参数,以比较龙血竭及其包合物的生物利用度。同时对龙血竭及其包合物不同时间点体内心、肝、脾、肺、肾及脑组织中的分布进行初步研究。结果1. 用该方法对龙血竭及其包合物进行溶出实验,结果显示 10min 时,龙血竭及其包合物的累计溶出度为 3.78%及 79.13%;60min 时龙血竭及其包合物的累计溶出度为 30.40%及 92.52%,溶出量提高了 3 倍,表明将龙血竭制成包合物后,有效地提高了龙血竭的溶出速度及程度。2. 建立的 Caco-2 细胞模型符合实验要求,影响因素考察结果显示 p H7.4 为龙血竭及其包合物最佳转运环境。龙血竭包合物的 Papp 是等浓度龙血竭的 1.2~2.5 倍,表明将龙血竭制成包合物后有利于其在 Caco-2 细胞的吸收;Papp 均随浓度增大而下降且 Pratio<1.5,表明无外排泵参与,而是有某些载体蛋白参与,即易化扩散。3. 大鼠在体肠单向灌流模型中,结果显示将龙血竭制成包合物后,在小肠中的吸收速度与程度均提高了,不同浓度的龙血竭及其包合物中龙血素 A 及龙血素 B的 Ka 及 Papp 无统计学意义且随着浓度的增大而下降,表明吸收机制主要为被动扩散,还有类似主动转运或者易化扩散,结合 Caco-2 细胞结果,初步判断龙血竭及其包合物吸收机制为被动扩散,同时可能还有易化扩散。龙血竭包合物在不同肠段的吸收研究结果表明其在全肠道均有吸收,吸收窗主要在小肠,且在小肠中以十二指肠、回肠吸收较好。4. 与龙血竭相比,龙血竭包合物大鼠灌胃给药后,达峰时间(Peak time,Tmax)缩短,达峰浓度(Plasma concentration,Cmax)增大,血药浓度-时间曲线下面积(Area under the curve,AUC(0→t))增大,说明龙血竭包合后吸收速度加快,吸收程度增大;房室模型拟合分析均是一室模型,提示包合后没有改变其体内分布过程。组织分布实验结果显示龙血竭及其包合物在大鼠心、肝、脾、肺、肾及脑组织中均有分布,且包合物组各组织中含量高于未包合物组;此外,在心、脑组织中,包合物组龙血素 A 及龙血素 B 的吸收速度加快、吸收程度增大,表明增加了药物对血脑屏障的通透性及对心脏的亲和力。结论龙血竭及其包合物体外溶出度研究,Caco-2 细胞、大鼠在体肠及灌胃给药吸收特性研究结果表明:将龙血竭制备成包合物提高了溶出速度及程度,吸收得到有效的提高,从而改善其生物利用度,并且未改变其吸收机制。