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本文研究目的:在中医基础理论指导下,以及在导师以往临床和实验研究的基础上,参考有关文献报道,以H22肝癌荷瘤小鼠为研究对象,以健脾益气法为立方依据,精心选取中药组成健脾益气方。通过对健脾益气方、化瘀解毒方等不同复方以及配合西药化疗治疗肝癌的比较,旨在探讨健脾益气类方药对肝癌的防治作用及其机理。比较健脾益气方、化瘀解毒方等不同复方以及配合西药化疗抑制H22肝癌荷瘤小鼠模型的作用机制,观察其对H22肝癌小鼠一般状况、体重、死亡率的影响,探讨健脾益气方对小鼠H22肝癌细胞凋亡以及对bax基因蛋白表达、bcl-2基因蛋白表达的影响。从中探讨健脾益气法诱导肿瘤细胞凋亡的机制,更好地为临床应用提供依据具有重要意义。本课题的完成,不仅有助于深入探明肝癌的发病及其治疗机制,而且可以进一步确立和提高中医药治疗肝癌的地位。
研究方法:实验选用昆明种小鼠75只,建立小鼠H22肝癌荷瘤模型。采用H22小鼠腹水瘤移植法建模后,随机分为5组,即模型对照组、健脾益气组、化瘀解毒组、健脾益气加化疗组、化瘀解毒加化疗组,每组15只;各组动物均自由饮水和进食,分笼喂养于20±3℃明暗各12h的动物实验室内。接种后第二天开始给药,除空白对照组给予基础饲料外,各组以相应药物给药,观察其对H22肝癌小鼠一般状况、体重、死亡率的影响,连续10天后处死动物取瘤体称重,计算抑瘤率;石蜡切片用免疫组化法检测bax基因蛋白表达和bcl-2基因蛋白表达水平。采用TUNEL(原位缺口末端标记法)检测肿瘤细胞凋亡,测定凋亡细胞,得出凋亡指数。
研究结果:①一般情况以健脾益气组和健脾益气加化疗组较好,其余各组生命状态较差;②与模型对照组相比,四个治疗组的平均瘤重均降低,其中以健脾益气加化疗组及化疗组较明显。健脾益气组抑瘤率为24.18(P<0.05),健脾益气加化疗组抑瘤率为16.70(P<0.05);化瘀解毒、化瘀解毒加化疗组均无显著的统计学意义(p>0.05)。③光镜下观察,发现凋亡细胞发生特征性形态学改变。④健脾益气组和健脾益气加化疗组能上调H22肝癌小鼠bax基因蛋白表达的水平(P<0.05),而化瘀解毒组、化瘀解毒加化疗组无明显上调H22肝癌小鼠bax基因蛋白表达。⑤健脾益气组、健脾益气加化疗组药物可以明显降低bcl-2基因的表达(P<0.01),而化瘀解毒组、化瘀解毒加化疗组无明显降低bcl-2基因表达(p>0.05)。⑥健脾益气组、健脾益气加化疗组其凋亡指数较对照组明显升高(P<0.01)。
研究结论:健脾益气方在对于肿瘤的治疗作用方面明显优于其他四组,且无健脾益气加化疗组的毒副作用,其机制可能与健脾益气法可以诱导肿瘤细胞的凋亡,提高机体免疫力有关。健脾理气方能诱导H22肝癌细胞凋亡,并上调肿瘤细胞bax基因蛋白表达,减少bcl-2基因蛋白表达有关。可能是健脾益气方抗癌机制之一。因此,本课题的实验研究对于确立中医药防治肿瘤具有重要意义。