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人体皮肤黑色素的产生是皮肤保护自身免受自然界紫外线破坏的正常过程。但黑色素产生过多则会造成色素增多性疾病，如黑斑病、黄褐斑、老年斑等疾病。黑色素产生于皮肤的黑色素细胞，其生物合成过程需多种酶介导，酪氨酸酶是其中重要的一种酶，它能够将酪氨酸氧化为多巴（DOPA），进一步氧化成多巴醌（DOPAquinone），在其他酶的作用下氧化聚合为黑色素。皮肤黑色素细胞位于表皮层靠近角质层的位置上。因此如何采用有效的局部给药制剂使药物聚集到皮肤活性部位达到起效浓度，是一个关键的问题。在研究中，黑色素生成抑制剂的剂型因素对其黑色素生成抑制活性的影响很少涉及，在皮肤内滞留量的研究也很少，因此本文研究着重在于选择不同的剂型对皮肤局部导入黑色素生成抑制剂效果的研究，同时对几种黑色素生成抑制剂的作用机理进行了探讨。 首先，本论文将B16小鼠黑色素瘤细胞培养应用于黑色素生成抑制剂的筛选及细胞毒性的研究，为黑色素生成抑制剂的筛选建立了一种简便、快速的方法，并可能发展成为高通量筛选方法。同时利用生物酶反应，对黑色素生成抑制剂的机理进行了探讨。采用黑色素细胞刺激激素（α-MSH）和茶碱刺激B16细胞分泌黑色素，研究了黑色素生成抑制活性药物对B16细胞黑色素释放的抑制作用。熊果苷（AR）、L抗坏血酸（VC）、氢醌（HQ）和新型黑色素生成抑制剂Melanoston（MN）都能抑制B16细胞黑色素的分泌，具有较强的黑色素生成抑制活性，其作用强弱顺序为HQ＞MN＞AR，VC为非浓度依赖性抑制而未计算IC50值。本文应用MTF（四唑盐）法测定了黑色素生成抑制活性物质AR、龙胆酸（GA）、VC、HQ和MN对B16细胞的毒性。HQ具有很强的细胞毒作用，不宜大剂量应用，AR、GA、VC、MN细胞毒性都很弱，其中GA的毒性最小，测得IC50为1735.3μg／ml，适于长期应用，细胞毒作用强弱顺序为HQ＞VC＞MN＞AR＞GA。同时利用生物酶反应，对上述黑色素生成抑制剂的黑色素生成抑制机理进行了探讨，AR、GA、VC、HQ对酪氨酸酶活性均有抑制作用，强弱顺序为HQ＞GA＞AR＞VC，MN对酪氨酸酶活性无抑制作用。AR和GA对酪氨酸酶活性的抑制作用为竞争性抑制。 其次，研究了不同剂型对皮肤局部导入黑色素生成抑制剂效果的影响。采用高压乳匀法制备了新型脂质体—熊果苷传递体，激光散射法测得传递体的平均粒径为91.7nm。在处方优化中考察了乳匀机孔径、表面活性剂浓度和药物浓度对传递体的包封率的影响。乳匀机孔径增大传递体的包封率上升；随药物浓度的增加，AR传递体的包封率明显下降，但绝对包封量增加，这可能是由于当包封的内沈阳药科大学博士学位论文 摘要水相体积不变时，其中药物浓度的增加而造成的；传递体处方中的表面活性剂胆酸aA)的含量增加使传递体的包封率降低。 对黑色素生成抑制活性物质熊果音传递体的局部给药效果进行了研究。测定了AR的基本理化性质，经大鼠全皮的穿透为零级过程。在大鼠体外经皮穿透研究中，5％AR传递体的穿透速率为8．91＊．33pg／cm’b，传递体在给药初期比相同浓度水溶液透过更快。在AR传递体的皮内滞留量的研究中，在给药初期随给药时间的延长，AR在角质层及活性表皮和真皮层中的滞留量增加，AR传递体3小时后药物滞留量即达到稳态，而AR水溶液直到9小时才达到稳态。在1、3、6小时，传递体能够使药物在角质层中的滞留量明显高于水溶液（显著性P＜0刀1），而达到稳态后，即9小时后活性表皮真皮层中的药物滞留量，二者则无明显差别。随载药量的增加，AR传递体和水溶液均能增加药物在皮肤角质层以及活性表皮真皮层中的滞留量，载药量大于3％时，则不再有明显增加，即皮肤内药物滞留达到平衡。探讨了传递体的变形性，在一定外压下，随胆酸含量的增高，传递体混悬液通过微孔滤膜的相对速率增大，而传递体混悬液粘度则随胆酸浓度增加而增加。可在一定程度上说明加入胆酸能够增加传递体的柔性。 为了将龙胆酸有效地导人皮肤，研制了GA压敏胶骨架型贴剂，进行了经大鼠皮肤的透过和皮内滞留量的研究。测定了GA的基本理化性质。在贴剂的处方筛选中，考察了五种压敏胶对贴剂释放的影响，其中DuroTak87－25 10最为有效，以1％的十二烷胺为穿透促进剂时，GA的透过速率为27刀8＊石3p吵m勺h。同时考察了五种透皮促进剂：油酸、Transcutol、Azone、DEET、十一烷胺。十一烷胺为最有效的促进剂，浓度为卫％时，2％GA贴剂的增渗比达61倍，十二烷胺还可显著提高药物的皮内滞留量。增加药物浓度也可提高GA的经皮透过速率和皮内滞留量，GA含量为6％的穿透速率为112．99。30．12 pgicm扣。在大鼠皮肤体内滞留量的研究中，12小时的皮内药物滞留量与药物的透过速率呈线性关系＊＼0．95)。 为了进一步确证贴剂的在体吸收效果，采用胶带剥离技术研究了贴剂无毛小鼠在体皮肤滞留量。随贴剂给药时间的增加，在角质层、活性表皮和真皮层中的GA的滞留量均增加，在角质层、活性表皮和真皮层中的药物滞留量有显著性差异（动刀1），在去掉贴剂后，角质层的滞留药物具有贮库作用。