人参多糖对巨噬细胞活性的影响及其与白血病细胞增殖抑制及凋亡关系

被引量 : 0次 | 上传用户:brian125
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究背景:白血病是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤,迄今白血病的治疗仍主要采用传统的大剂量联合化疗,但此疗法副作用大,复发率高,而且对正常机体免疫与造血系统有极大的损害。中药多糖能非特异性地增强机体的免疫功能,提高化疗、放疗的抗癌效应及减少其副作用。近年来,中药多糖的免疫调节活性及抗肿瘤作用倍受关注,成为中药多糖研究的重要课题。人参(Panax Ginseng C.A.Meyer)作为祖国传统医学的“补气”要药,已有数千年的临床应用历史,人参多糖(Ginseng polysaccharide,GPS)是人参的主要有效药物成分之一。传统中医理论认为:人参有“补气生血,扶正祛邪”之功效。我们既往研究表明:GPS是人参中促进血细胞发生的有效成分,GPS对小鼠多能造血干细胞(CFU-S)、人与小鼠造血祖细胞(BFU-E、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E等)的增殖分化有显著刺激作用。同时,GPS能够抑制人早幼粒白血病细胞株HL-60的增殖,对移植性人白血病模型小鼠也有显著疗效。巨噬细胞(macrophages, MФ)是机体内具有多种功能的重要免疫细胞,可通过处理抗原和释放可溶性因子对免疫功能起重要的调节作用。腹腔巨噬细胞(peritoneal elicited macrophages, PEMФ)常作为巨噬细胞研究的代表,用于其功能的探讨。我们既往研究证明,GPS能促进PEMФ的功能活动。但关于多糖激活PEMФ的机制,目前尚未完全清楚。本研究采用现代生物学技术,较为系统的探讨了GPS对PEMФ活性的影响及其与白血病细胞增殖抑制及凋亡的关系,旨在阐述人参“扶正祛邪”与抗肿瘤的相互关系与生物学机制,为临床开发治疗白血病的天然抗肿瘤药物提供实验依据。方法:1.小鼠PEMФ的分离纯化与鉴定:体外分离小鼠PEMФ,在含10%FBS的培养液中进行体外贴壁培养。倒置显微镜下观察细胞生长状态;酸性磷酸酶及非特异性酷酶染色检测,光镜观察细胞内酶的表达;吞噬鸡红细胞及墨汁颗粒实验检测其吞噬功能;CD68免疫细胞化学染色观察细胞表面标志,通过这些生物学技术鉴定培养细胞的性质。2. GPS对PEMФ功能的影响:将分离纯化的PEMФ与不同浓度的GPS进行共培养,检测其相关酶活性、吞噬功能及表面抗原的表达。3.经GPS诱导制备的PEMФ培养上清对白血病细胞凋亡的影响:将PEMФ与GPS共培养所获得的条件培养液,加入到K562、HL-60、KG1a白血病细胞培养体系中,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,观察经GPS诱导制备的PEMФ培养上清对白血病细胞增殖的影响。通过透射电镜观察、流式细胞术(FCM),研究经GPS诱导制备的PEMФ培养上清对白血病细胞凋亡的影响。4. GPS对PEMФ分泌生物活性因子及其与抑制白血病细胞增殖、凋亡之间的关系:采用Griess法、ELISA法,以及小鼠胸腺细胞增殖法分别测定条件培养液中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、IL-6、IL-12和IL-1的浓度,研究GPS对PEMФ生物学活性的影响及其与抑制白血病细胞增殖、凋亡之间的关系。结果:1.人参多糖对腹腔巨噬细胞活性的影响获得的PEMФ在生活状态下呈椭圆形、三角形或不规则形,胞浆丰富;HE染色后可见细胞有丰富的胞浆,胞浆内富含颗粒及少许空泡,核为圆形或卵圆形;细胞酶化学染色见酸性磷酸酶、非特异性酯酶均为阳性。吞噬功能检测细胞能吞噬鸡红细胞和墨汁颗粒,且吞噬率较高。免疫细胞化学染色CD68表达为阳性。研究经过形态学,酶化学,吞噬功能检测及免疫细胞化学证实所培养的细胞是纯化的,功能良好的PEMФ。与GPS共培养后,PEMФ的酸性磷酸酶及非特异性酯酶的合成与分泌增加,吞噬鸡红细胞与墨汁颗粒的功能增强,CD68的阳性表达率及表达强度提高,不同浓度的GPS对PEMФ的促进作用有一定的差别,以GPS终浓度为100mg/L时的促进作用最为明显。2.经GPS诱导制备的PEMФ培养上清对白血病细胞凋亡的影响MTT法显示,经GPS(25~200mg/L)诱导制备PEMФ对K562、HL-60、KG1a的增殖均有抑制作用,于100mg/L时,抑制率达到最高。透射电镜观察发现,K562、HL-60、KG1a 3种白血病细胞均发现有染色质浓缩、核的碎裂和凋亡小体等典型的凋亡特征出现,经流式细胞术检测表明,经GPS诱导制备的PEMФ培养上清对3种白血病细胞均有促进凋亡的作用。与阴性对照组相比,经GPS(25~200mg/L)诱导制备的PEMФ培养上清对白血病细胞的凋亡均有增强作用。3. GPS诱导的PEMФ培养上清液促进白血病细胞凋亡的生物活性因子分析在PEMФ与GPS共培养的条件培养液中,NO、TNF-a、IL-6和IL-1的分泌均有所增加,而IL-12的含量并未见明显增加。结论:人参多糖能够激活腹腔巨噬细胞,显著增强其功能,可能通过促进PEMФ分泌NO、TNF-a、IL-6和IL-1等效应分子,抑制白血病细胞的增殖,促进其凋亡,这也许是人参“扶正祛邪”的细胞与分子生物学机理之一。
其他文献
网络购物是一种新兴的购物方式。由于它能够提供丰富的商品信息,突破时空限制,低成本,具有购物的方便性,并能为消费者提供个性化和定制化的商品,因而比传统的购物方式具有更
随着Internet在全球的不断扩展和用户数量的迅速增加,人们对视频需求也呈现多样化。但Internet的本质决定只能提供有限且不固定的网络传输带宽,传统的视频编码方法满足不了这
自20世纪50年代以来,我国在干热河谷引种造林方面已取得很大成绩,但在树种选择上,仍存在不少问题。为此本文进行智利牧豆(Prosopis chilensis L.)和牛蹄豆(Pithecellobium dulce
目的:探讨乌司他丁(Ulinastatin UTI)对百草枯(paraquat PQ )中毒致大鼠急性肺损伤的保护作用。方法:选用健康SD大鼠70只随机分为百草枯中毒组(PQ组25只)、乌司他丁组(UTI组2
为解决在产品生命周期各个不同阶段中决策与之相对应的供应链及其供应链上延迟策略具体实施的问题。本文主要进行了以下四个方面的研究:第一,根据延迟策略可在供应链的生产流
随着用软件模拟计算机硬件的虚拟化技术的迅猛发展和日趋成熟的应用解决方案,以及计算机硬件性能的不断提升和硬件对虚拟化技术支持的逐步成熟和完善(如Intel VT,AMD-V技术),
地铁列车牵引转矩控制是影响列车安全可靠运行的重要因素,牵引变流模块是整个列车交流传动系统的核心设备,而牵引转矩控制又是最关键的部分。本文以某城市国产化地铁列车为研
改革开放以来,江苏经济历经了30多年的快速增长。近几年,同全国一样,江苏也处在经济增速换挡期、结构调整阵痛期、前期刺激政策消化期,增长动力转换成为转型发展新阶段的主要
南非共和国(The Republic of South Africa简称南非),是非洲大陆上一个重要的国家,也是非洲大陆经济实力最强的国家之一。因为历史的原因,中国和南非的往来中断了几十年,致使