造血干细胞(HSC)具有自我更新能力并能分化为各种血细胞前体细胞,最终生成各种血细胞成分,包括红细胞、白细胞和血小板,它们也可以分化成各种其他细胞。造血干细胞的两个重要特征是,可分化成所有类型的血细胞和高度的自我更新或自我复制能力。造血干细胞(HSC)成功植入到骨髓需要两个条件:(1)HSC能归巢于骨髓特定的造血微环境;(2)HSC能在这一特定的微环境内维持长期造血。造血干细胞生存的特定微环境称之为造血微环境,又称为造血干细胞龛,由骨髓中邻近造血干细胞的支持细胞构成,参与造血干细胞的维持、自我更新和定向分化。骨髓造血微环境中的基质细胞包括成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞、网状细胞、脂肪细胞、间充质细胞,这些基质细胞在体外对HSC均有不同程度的扩增作用。为了更好地研究HSC的造血机制和体外扩增体系,本课题:(1)通过In Vivo mAb Ly-6C抗体清除实验,了解体内造血干细胞扩增机制;(2)定量检测小鼠造血重建过程中骨髓基质细胞中22种基因表达量的动态变化趋势,为我们鉴定和研究造血干细胞关键分子提供直观依据;(3)构建造血干细胞与基质细胞的无血清共培养体系,为体外扩增造血干细胞提供一些理论依据以及实验方法。研究结果表明,小鼠注射In Vivo mAb Ly-6C抗体特异性清除骨髓来源的Ly-6C+细胞,分析小鼠骨髓造血干祖细胞的作用,表明在骨髓来源的Ly-6C+细胞被定向清除后,长效,短效造血干细胞,多能祖细胞(MPP)的表达均呈现上调趋势。表明了小鼠体内的骨髓来源的Ly-6C+细胞对于造血干细胞的扩增是具有抑制作用的。在正常的骨髓造血微环境中,存在着负责造血调控的正负调节因子,大部分的正负调控因子是由骨髓细胞中的Niche细胞产生的,通过荧光定量PCR的方法鉴定这些非血管内因子的表达情况,能够帮助我们在体外培养造血干细胞时,利用清除抑制因子,添加促进因子来优化培养体系。