目的：通过实验克隆,从具有经济价值的脊椎动物(青蛙、蟾蜍、家鸡、罗非鱼)中获得新miRNA,选择材料为不同进化阶段的物种,寻找物种间具有保守性的新miRNA,并与miRNAbase里miRNA进行比对和保守性分析,根据与已知功能miRNA保守性分析和生物信息学分析,进一步进行功能预测与验证。方法：1.直接克隆法获得miRNA序列；2. RT-PCR方法和地高辛杂交法实验确定新miRNA;3.生物信息学预测保守性miRNA以及实验验证；4.半定量PCR检测miRNA的表达差异。结果：通过克隆成功获得了4条保守性的序列,并与已经收集在库的miRNA319同样具有很高的同源性,运用了生物信息学方法在鱼中预测与这4条序列具有保守性miRNA,并在鲤鱼得到实验的验证。同时利用半定量PCR检测了从青蛙中获得miRNA,在寒冷的诱导状态和室温下,出现了表达差异。结论：本研究尝试直接将RNA加到尼龙膜上,然后直接杂交,省出电泳和转膜步骤,传统的转膜效率存在不稳定,对于实验室不具备先进的转膜设备,是一种不错的选择。克隆得到的具有保守性的miRNAs,为动植物之间miRNAs存在保守性提供了新的证据；通过半定量PCR检测青蛙中这条miRNA在不同的温度状态下出现的表达差异,推测其表达与温度存在一定的联系,为动物抗寒机制研究打下基础；这些来源不同进化阶段的保守性miRNA,也为研究物种的进化规律提供一条新的思路。