目的:构建含有过氧化氢酶基因(catalase,cat)的基因工程乳酸菌(Lactic acid bac-teria,LAB),为发展环境抗性的基因工程乳酸菌提供试验方法,奠定理论基础。　　 方法:培养大肠杆菌(E.coli W3110),提取基因组DNA,采用限制性内切酶Sau3AI进行部分酶切,分离纯化1.5Kb以上的DNA片段。BamHI酶切大肠杆菌质粒pUC18后,与经Sau3AI部分酶切不同片段用T4连接酶进行连接,转化大肠杆菌DH5α。通过BHI-单宁酸培养介质,先厌氧培养,再有氧培养,诱导过氧化氢酶酶活性,从而筛选出含有过氧化氢酶的基因克隆。将筛选出的基因片段与经BamHI酶切后的乳酸乳球菌表达载体质粒pRV300连接,将重组质粒pRV300-cat电转入乳酸乳球菌NZ9000中,筛选出转化子NZ9000-cat,对重组菌株进质粒抽提,鉴定。　　 结果:分离到了大肠杆菌过氧化氢酶基因,并将重组质粒pRV300-cat电转入NZ9000。成功构建了含有cat基因的重组载体pRV300-cat,经酶切,PCR鉴定后与预期结果完全吻合。　　 结论:成功的利用限制性内切酶Sau3AI部分酶切大肠杆菌基因组DNA,并筛选出E.coli cat基因。为E.colicat基因通过载体pRV300在乳酸乳球菌中表达奠定了基础。