淫羊藿苷配伍人参皂苷Rg1对骨髓间充质干细胞成骨分化作用的研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wyman_wmw
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本文旨在探讨淫羊藿苷和人参皂苷Rg1单体及两者配伍对骨髓间充质干细胞成骨诱导的作用,从而考察其在骨质疏松症方面的治疗潜力。用Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)分别检测加药后24 h、48 h、72 h细胞的增殖情况,观察淫羊藿苷和人参皂苷Rg1单独用药及不同浓度配伍对C57小鼠骨髓间充质干细胞增殖情况的影响,筛选出最佳用药浓度;在成骨诱导16 d、30 d后进行碱性磷酸酶和茜素红染色,观察不同处理组矿化能力;采用RT-PCR及WB检测成骨细胞标记性蛋白BMP2、RUNX2、OPN、OCN的表达情况,考察不同处理组骨髓间充质干细胞成骨分化能力。在药物筛选过程中淫羊藿苷终浓度分别为0.1μmol·L-1,1μmol·L-1,10μmol·L-1,人参皂苷Rg1终浓度分别为10μmol·L-1,20μmol·L-1,40μmol·L-1,与普通培养条件下细胞作用后,从时间上来看,在各检测时间点,各实验组A值与对照组相比均增加(P<0.05),淫羊藿苷和人参皂苷Rg1单体用药最佳浓度分别为1μmol·L-1和10μmol·L-1;淫羊藿苷1μmol·L-1和人参皂苷Rg110μmol·L-1组合A值大于单体用药(P<0.05)。淫羊藿苷和人参皂苷Rg1配伍最佳浓度为淫羊藿苷1μmol·L-1和人参皂苷Rg120μmol·L-1组合,与淫羊藿苷1μmol·L-1和人参皂苷Rg110μmol·L-1组合对比有一定的剂量效应。成骨诱导16 d后加药后各组碱性磷酸酶的表达及钙结节的数量均高于空白对照和经典成骨对照,淫羊藿苷与人参皂苷Rg1配伍组染色程度高于其他各组;成骨诱导30 d后染色趋势与16 d基本一致,淫羊藿苷与人参皂苷Rg1配伍组染色程度高于其他各组。与对照组相比,加药组能够显著上调诱导细胞中成骨标记性蛋白BMP2、OCN、OPN、RUNX2等的表达,淫羊藿苷和人参皂苷Rg1配伍组因子表达量高于单体用药。综上所述,淫羊藿苷与人参皂苷Rg1配伍能够增加骨髓间充质干细胞成骨能力,这可能与上调成骨因子促进骨髓间充质干细胞向成骨分化形成新的骨细胞并且抑制骨髓间充质干细胞向其它细胞分化相关。并且淫羊藿苷和人参皂苷Rg1能够显著促进骨髓间充质干细胞增殖,未见明显的毒性反应,具有良好的治疗骨质疏松症前景。
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