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在妊娠过程中，胚胎着床是一个重要环节。胚胎着床是受精卵发育至脱带囊胚期后对子宫内膜的粘附入侵的一个复杂生理过程。它包括胚泡的定位、粘附及植入。胚胎着床的关键步骤是胚胎滋养层细胞对子宫内膜的侵入，与母体成份共同形成胎盘。滋养层细胞与子宫内膜上皮细胞和基质细胞之间、上皮细胞和基质细胞之间的“对话”，精确调节滋养层细胞的增殖分化和子宫内膜的蜕膜化，从而保证滋养层细胞(Trophectoderm,TE)的适度侵入[1]。人类胚胎着床发生在促黄体素(Luteinizinghormone，LH)峰之后大约7～11天(day,d)，小鼠胚胎的“着床窗”在妊娠4～5d，持续24h左右，受到多种激素、生长因子及粘附分子等因素的调控。近年来研究发现，剔除leptin基因的ob/ob小鼠由于缺乏功能性leptin而导致肥胖和不育，给予外源性leptin又能恢复其生育能力，但在胚胎发育第4d前停止给予leptin，妊娠又将中断[2,3]。因此体内一定水平的leptin是保证生殖功能正常的前提，过高或过低都可能破坏这种平衡，影响生殖功能，甚至导致不孕。
为了更好地理解leptin在胚胎围着床期中的作用，我们采用了RT-PCR、免疫组化和免疫荧光等分子生物学技术来探讨胚胎围着床期leptin在子宫组织和胚胎中的表达规律，旨在为胚胎着床机理提供新的理论依据。
试验一目的：探讨leptin在妊娠早期小鼠子宫中的表达规律。方法：性成熟雌性NIH小鼠用孕马血清促性腺激素(pregnantmareserumgonadotrophin，PMSG)和绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotrophin，hCG)进行超排卵，与成熟雄鼠交配，在妊娠1d-6d分别脱臼处死小鼠取其子宫，用DMEM/F12培养液充分冲洗子宫，然后进行以下试验：1.分别提取总RNA，检测小鼠子宫以及胚胎着床点和非着床点的子宫leptinmRNA表达规律；2.分别用10﹪福尔马林固定，石蜡包埋，切片，然后进行免疫组织化学试验，检测leptin蛋白的表达规律。结果：妊娠1-6d小鼠子宫均有leptinmRNA和蛋白表达，leptin蛋白主要定位于腔上皮和腺上皮；LeptinmRNA水平呈现规律性表达，1d、2d表达微弱，3d开始增强，4d达到高峰，5d、6d仍维持在一定水平；无论妊娠5d或6d，着床点leptinmRNA水平比非着床点显著增强。结论：子宫组织表达的leptin与胚胎发育、胚胎着床的进程有密切关系。
试验二目的：探讨leptin在围着床期胚胎中的表达规律。方法：性成熟雌性NIH小鼠用PMSG和hCG进行超排卵，与成熟雄鼠交配，分别在妊娠1d-3d上午脱臼处死小鼠取其输卵管，冲取2-cell、4-cell、8-cell；在妊娠4d取其子宫角，冲取桑椹胚、囊胚。保存于-80℃，然后进行以下试验：1.分别提取总RNA，检测胚胎中leptinmRNA表达情况；2.试验当天冲取扩展囊胚进行免疫荧光试验，在激光共聚焦显微镜下观察leptin蛋白的表达和分布情况。结果：leptinmRNA和蛋白仅在囊胚期特异性表达，其余各时期未见leptinmRNA和蛋白的表达。结论：leptin参与了胚胎着床过程。