目的探讨依达拉奉(Edaravone)通过PINK1/Parkin1通路对脑缺血再灌注损伤(Cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠脑细胞自噬的影响,并进一步探究其发挥作用的机制?方法SD大鼠被随机分为4组:假手术组(Sham gruop)、脑缺血再灌注模型组(MCAO group)、依达拉奉组(Edaravone group)、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)组(3-MA group)?Sham组、Model组、Edarabone组均采用提前1周腹腔注射给药,3-MA组采用侧脑室注射给药。除sham组外,其余均采用大脑中动脉阻断法建立大鼠局灶性缺血再灌注模型,依达拉奉组和3-MA组分别给予依达拉奉3ml·kg-1,3-MA 75μg,其余两组均使用等量生理盐水。术后采用神经功能缺损评分、氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色及脑水肿检测验证模型及药效?采用透视电镜技术观察脑组织线粒体自噬情况;采用JC-1法观测细胞膜电位变化;采用免疫印迹法检测各组大鼠PINK1/Parkin1通路相关因子?结果(1)模型鉴定及药效检测:Sham组大鼠未见神经功能缺损、脑梗塞及脑水肿症状。Model组、3-MA组和Edaravone组大鼠均有不同程度的神经功能缺损、脑梗塞及脑水肿症状。与Model组比较,上述指标在Edaravone组显著降低,而3-MA组虽高于模型组,但无统计学差异。结果提示,经3-MA抑制自噬后神经功能缺损症状未见缓解,而经Edaravone处理后症状显著减轻。(2)电镜观察于假手术组可见正常的线粒体,线粒体嵴结构完整。而Model组、Edaravone组可见不同程度的自噬小体。统计结果显示,与Sham组比较,Model组、Edaravone组、3-MA组的自噬小体数量显著增高。与Model组比较,Edaravone组数量显著增高,但3-MA组的自噬小体数量则显著降低。提示Edaravone诱导缺血再灌注的自噬反应,而3-MA抑制了细胞自噬。(3)采用荧光酶标仪分析JC-1检测结果显示,与Sham组比较,Model组、3-MA组和Edaravone组JC-1聚合物与单体比值显著降低;与Model组比较,Edaravone组显著增高,而3-MA组与模型组无统计学差异。此结果说明经3-MA抑制自噬后线粒体膜电位未见明显改善,而经Edaravone处理后线粒体膜电位得到明显改善。(4)Western Blot检测结果显示,各组均可见明显的PINK1、Parkin1、LC3B表达条带。与Sham组比较,Model组、Edaravone组的PINK1、Parkin1、LC3B水平显著增高;与Model组比较,Edaravone组PINK1、Parkin1、LC3B水平显著增高,但3-MA组则显著降低;提示Edaravone诱导缺血再灌注的PINK1、Parkin1、LC3B表达水平,从而诱导线粒体自噬,而3-MA则抑制了PINK1、Parkin1、LC3B的表达从而抑制线粒体自噬。结论1、脑缺血再灌注后线粒体自噬被启动,依达拉奉能够诱导脑缺血再灌注后的线粒体自噬,改善线粒体膜电位,减轻神经功能缺损评分、脑梗塞面积及脑水肿含量,发挥对脑缺血再灌注损伤后的保护作用。2、依达拉奉可能通过上调脑缺血再灌注后的PINK1/Parkin1通路及自噬标志性因子LC3B的表达水平,诱导线粒体自噬,发挥脑保护作用。