新型顺磁性铁纳米粒子标记SD大鼠脂肪源性干细胞的MRI活体示踪

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目的:利用新型顺磁性铁纳米粒子PEG/PEI-SPIO对SD大鼠脂肪源性干细胞(ADSCs)体外进行标记,将标记后的SD大鼠ADSCs移植入慢性脑缺血的SD大鼠颅内,观察标记后的SD大鼠ADSCs移植后颅内的MRI表现,探索新型顺磁性铁纳米粒子对干细胞移植活体示踪的可能性。  方法:①.体重200±20g的SPF级的SD雌性大鼠60只,进行双侧颈总动脉永久性结扎术,术后饲养在SPF级的的动物实验室,给予正常的喂养,饲养14个月后用于干细胞移植所用。②.分离、培养、传代SD大鼠ADSCs至P3代,用25ug/ml的浓度的PEG/PEI-SPIO与ADSCs共孵育培养12h后用于细胞移植用。③.进行双侧颈总动脉永久性结扎的30只SD雌性大鼠随机分成两组:PEG/PEI-SPIO标记细胞移植组、未标记细胞移植组;PEG/PEI-SPIO标记细胞移植组的SD大鼠用10%水合氯醛(350mg/kg)行腹腔麻醉后,无菌操作,利用大鼠脑立体定位仪,选取右侧侧脑室为移植区进行干细胞移植,用微量注射器吸取3μL的含有1×105个PEG/PEI-SPIO标记的ADSCs悬液,通过大鼠立体定位仪移植注射入大鼠右侧侧脑室内。未标记细胞移植组按上述方法向右侧侧脑室内注入等体积的未标记的ADSCs。④.分组选取移植术后7天、14天、21天3个时间点,在MRI成像条件下,通过T2-mapping序列分别对PEG/PEI-SPIO标记细胞移植组和未标记细胞移植组的SD大鼠的颞顶叶皮质、海马、小脑的T2弛豫时间进行测量,对测出的T2弛豫时间的进行统计学分析。⑤.MRI扫描结束后,两组大鼠经心脏灌注断头取脑,脑组织进行HE染色、普鲁士染色;在高倍镜下,对各时间点、各脑区蓝染颗粒进行计数并进行统计学分析。  结果:①.双侧颈总动脉永久性结扎术致SD大鼠慢性脑缺血模型制作过程中,60只SD大鼠在术中共死亡5只,术后大鼠清醒后回笼饲养,可以进行正常饮水和进食,术后仍出现死亡25只,存活30只,存活率50%。②.分离、培养、传代至P3代的ADSCs细胞形态均一,呈多角形、纺锤形、梭形生长;25ug/ml浓度的PEG/PEI-SPIO与ADSCs共孵育培养12h后,细胞铁标记率达到95%,细胞形态无明显改变。③.MRI扫描示标记细胞移植组、未标记细胞移植组大鼠颞顶叶皮质、海马区在T2WI、T2*WI、SWI可见散在的类圆形低信号区,标记细胞移植组、未标记组细胞移植组的大鼠小脑在T1WIT2WI、T2*WI未发现明显的异常低信号。④.在ADSCs移植后第14d,标记细胞移植组与未标记细胞移植组相比较,标记细胞移植组右侧颞顶叶皮质、右侧海马的T2弛豫时间较未标记细胞移植组缩短(P<0.05)。在ADSCs移植后第21d,标记细胞移植组与未标记细胞移植组相比较,标记细胞移植组右侧颞顶叶皮质、左侧小脑T2弛豫时间较未标记细胞移植组缩短,有统计学差异(P<0.05)。⑤.大鼠脑组织HE染色示标记细胞移植组和未标记细胞组大鼠大脑颞顶叶皮质、海马神经元受损,小脑神经元未见明确异常。⑥.标记细胞移植组和未标记细胞移植组大鼠大脑颞顶叶皮质、海马组织的普鲁士染色可见散在蓝染颗粒,小脑组织内未见明确蓝色颗粒。标记细胞移植组在移植后第14天右侧海马蓝染颗粒数量较未标记细胞移植组相应时间点、脑区的蓝染颗粒的数量增多,差别有统计学意义。  结论:①.双侧颈总动脉永久性结扎致慢性脑缺血可导致大鼠颞顶叶皮质、海马区损伤。②侧脑室移植PEG/PEI-SPIO标记ADSCs能向因慢性脑缺血致受损的海马迁移。③.用临床型3.0T MRI活体示踪移植PEG/PEI-SPIO标记ADSCs在SD大鼠慢性脑缺血模型脑内迁移和分布具有一定价值,但仍存在局限性,有待进一步研究。
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