【摘 要】
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目的:鉴于Mex AB-Opr M外排泵是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一,拟观察黄连素对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌（Carbapenem resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA）外排泵Mex AB-Opr M表达的影响,并探讨黄连素联合碳青霉烯类抗生素使用的抑菌效果,为黄连素对CRPA抑菌机制研究提供实验数据支撑。方法:1.利用外排泵抑制剂羰基氰
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目的:鉴于Mex AB-Opr M外排泵是铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一,拟观察黄连素对耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌（Carbapenem resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA）外排泵Mex AB-Opr M表达的影响,并探讨黄连素联合碳青霉烯类抗生素使用的抑菌效果,为黄连素对CRPA抑菌机制研究提供实验数据支撑。方法:1.利用外排泵抑制剂羰基氰酯-3-氯苯基腙（Carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone,CCCP）筛选出外排泵高表达表型菌株,并通过PCR扩增Mex AB-Opr M相关基因,经琼脂糖凝胶电泳成像进行基因型验证。2.采用q RT-PCR方法在m RNA水平研究黄连素对菌株Mex AB-Opr M外排泵表达的影响。3.采用棋盘稀释法进行黄连素与美罗培南、亚胺培南联合药敏试验,探讨联合使用黄连素时碳青霉烯类抗生素对CRPA的抑菌效果。结果:1.从2018年1月至2018年6月收集的30株CRPA中筛选出11株外排泵高表达菌株,占36.7%;其中加入CCCP后3株亚胺培南MIC降至原来的1/4,7株美罗培南MIC降至原来1/4,1株美罗培南MIC降至原来1/8;通过琼脂糖凝胶电泳成像证实为Mex AB-Opr M外排泵高表达。2.以低浓度（128μg/ml）,高浓度（512μg/ml）黄连素干预实验菌株培养18 h后,q RT-PCR测定mex A,mex B,opr M基因相对表达量,经随机区组设计方差分析统计,低浓度黄连素处理组基因表达量均降低（P<0.05,P<0.05,P<0.05）,高浓度黄连素处理组基因表达量均降低（P<0.01,P<0.01,P<0.01）。3.联合药敏试验结果显示黄连素与亚胺培南联合协同作用占比36.36%,相加作用占比18.18%;黄连素与美罗培南联用协同作用占比45.45%,相加作用占比27.27%。结论:黄连素可以在m RNA水平抑制CRPA外排泵Mex AB-Opr M的高表达;黄连素与亚胺培南、美罗培南联合使用具有良好的协同抑菌效应,在一定程度上可以逆转CRPA对碳青霉烯类抗生素的耐药性。
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