α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)是一个由140个氨基酸残基构成的酸性蛋白,在脑组织中高度表达,主要聚集在神经元突触前末梢,在神经元的发育与形成、多巴胺合成、保持突触可塑性及突触囊泡的运输过程中发挥重要作用。相对于哺乳动物,禽类α-Syn的研究相对滞后,而关于王鸽α-Syn基因序列及其在王鸽脑内的分布还未见报道。本研究应用分子生物学技术克隆一段覆盖王鸽α-Syn完整编码区的序列;使用DNAMAN和DNAStar软件对人、黑猩猩、牛、猪、王鸽、原鸡、斑胸草雀及小鼠8种物种α-Syn cDNA编码区核苷酸和氨基酸序列进行比对,并构建生物进化树;利用基因工程技术在原核表达系统中表达了α-Syn并制备了多克隆抗体;应用免疫组化方法检测了王鸽脑组织中α-Syn的分布及阿维菌素(Avermectin,AVM)急性中毒对王鸽脑组织中α-Syn蛋白表达的影响,结果表明:1成功克隆了613 bp的王鸽α-Syn cDNA序列,其中包括ORF 432 bp,起始密码子ATG,终止密码子TGA,5′UTR区域16 bp,3′UTR区域165 bp,王鸽α-Syn由143个氨基酸残基组成,蛋白分子量为14.9 kDa。2王鸽与其他7个物种α-Syn编码区核苷酸序列同源性在81.71%~93.52%之间,与原鸡和斑胸草雀同源性最高均为93.52%,与黑猩猩的为83.80%,与人的为83.60%,与猪的为83.56%,与小鼠的为82.87%,与牛的为81.71%,王鸽与其他7种物种α-Syn氨基酸序列的同源性在83.22%~97.20%之间,说明不同物种间α-Syn基因高度保守,提示王鸽与其他已知物种α-Syn的功能相似。3在大肠杆菌表达系统中成功表达了pGEX6p-1-α-Syn融合蛋白,制备出兔抗王鸽α-Syn的多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体的效价为1:51 200,采用Western blot检测出多克隆抗体对于融合蛋白具有特异性。4王鸽海马、丘脑、嗅球、视叶、小脑5个部位中均检测到α-Syn,含量高低依次为海马、嗅球、丘脑、视叶和小脑,表明α-Syn在王鸽脑内分布广泛,并且分布具有差异性。5 AVM急性中毒后,王鸽海马、丘脑、嗅球、视叶和小脑5个部位中α-Syn蛋白表达均升高,海马、丘脑和嗅球的α-Syn表达与对照组相比差异显著(P<0.05),而视叶和小脑与对照组相比差异不显著(P>0.05),表明AVM急性中毒后,脑不同部位α-Syn表达量的升高具有差异性,提示AVM急性中毒引起的神经损伤与α-Syn表达增加有关。