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水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)引起的水稻条纹叶枯病是水稻上的一种重要病毒病,该病在我国的分布极为广泛。为了丰富水稻条纹病毒的分子群体遗传学,本研究对采自江苏、河南、云南、山东、福建等病害发生区的24个分离物RSV RNA2片段上的NS2基因的分子变异情况进行了分析。 24个分离物的病叶总RNA经特异引物RT-PCR扩增后均获得600bp左右的条带。将PCR产物进行单链构象多态性(single-strand conformationpolymorphism,SSCP)电泳分析,结果表明,不同分离物的NS2基因条带基本都呈现出差异。为了准确分析各分离物NS2基因间的变异情况,对这24个分离物进行了序列测定。序列分析结果表明,我国的24个及日本的T、O共26个分离物NS2基因序列的核苷酸同源性大于93.5%,氨基酸同源性大于93%;遗传距离为0-0.065。从构建的系统进化树可以看出,这些分离物分为两个组,一组包括云南的Y-BS03、Y-CX02、Y-YX02、Y-BQ02、Y-HT02、Y-LQ02、Y-WD02、Y-YR028个分离物,另一组包括云南、山东、福建、江苏、河南及日本在内的其它18个分离物。两组间的核苷酸序列具有93.5%-99.2%的同源性,氨基酸序列具有93.0%-98.0%的同源性;组间遗传距离为0.038-0.065。从据遗传距离构建的系统发育树看出,来自云南、福建、江苏、山东、河南、日本的分离物,可能具有共同的起源。 对采自同一地区、不同年份的分离物的序列进行分析,发现云南省的分离物在年度间表现出相对较大的差异。相应地,对采自同一年份、不同地区的分离物也进行了序列分析,结果发现,2002年的14个分离物NS2基因分子变异较大,其核苷酸序列的同源性为93.5%-99.7%,氨基酸序列的同源性为93.5%-100%,而2003年的10个分离物的分子变异较小,其核苷酸与氨基酸序列同源性均大于97.0%。这可能与分离物不同地理来源有关。 本研究构建了含RSV NS2基因的融合蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌(E.coli DH5α)中成功地进行了表达,为今后研究RSV NS2蛋白在病毒生命周期中的作用奠定基础。SDS-PAGE分析表明表达的融合蛋白GST-NS2相对分子量约为49,000。Western blot印迹显示,GST-NS2与该蛋白免疫兔子产生的抗血清有特异反应。应用PredictProtein(http://cubic.bioc.columbia.edu福建农林大学硕士学位论文对蛋白质二级结构、功能进行预测,并结合前人的实验研究,推测NSZ蛋白可能是运动蛋白,它与CP协同起作用。