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目的:人参皂甙Rg3是具有抗肿瘤生长和转移作用的单体抗癌中药,LeY抗原属于Lewis血型抗原家族的一员,位于细胞表面的糖蛋白和糖脂分子末端,也是连接许多表面受体的末端寡糖链,其化学结构为[Fucα1→2Galβ1→4(Fucα1→3)GlcNAc],为双岩藻糖寡糖。FUT1/4是其合成的关键酶。LeY在多数上皮来源的肿瘤细胞中高表达,而且与肿瘤细胞的生长,转移及浸润密切相关。EGFR是人表皮生长因子受体家族成员之一,多种恶性肿瘤异常高表达,当其配体EGF等与EGFR结合后,激活该受体的酪氨酸激酶,导致受体本身及细胞内酪氨酸残基的磷酸化,后者给细胞提供一个进行细胞分裂的信号,从而引起细胞的分裂增殖。通过对EGFR结构的分析,选择其特定部位作为靶点,使其与配体结合能力下降,抑制EGFR磷酸化,干扰EGFR信号传导是目前一些热点抗肿瘤药物的作用机制。本实验旨在研究人参皂苷Rg3抑制乳腺癌细胞增殖的有效药物浓度和肿瘤细胞细胞增殖核抗原(PCNA)、LeY寡糖抗原及其合成关键酶FUT1/FUT4、EGFR、磷酸化EGFR(p-EGFR)在人参皂苷Rg3作用前后的表达水平变化及它们之间的相互关系。方法:采用高表达EGFR和LeY的乳腺癌细胞株MCF-7,通过MTT、RT-PCR、Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光、免疫共沉淀等实验方法进行分析,根据人参皂苷Rg3对乳腺癌细胞的增殖抑制率,得出半数有效药物抑制浓度(IC50),分析乳腺癌细胞PCNA、EGFR、p-EGFR、LeY及其合成关键酶FUT1/FUT4表达水平变化。结果:1.人参皂甙Rg3在浓度为80μg/ml以上时能明显抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖(p﹤0.05),24h和48h药物对肿瘤细胞的抑制率未见统计学差异(p=0.793)。2.在160μg/ml(24小时的IC50)的有效药物浓度下,人参皂甙Rg3抑制了乳腺癌细胞PCNA、p-EGFR、LeY及其合成关键酶FUT1/FUT4的表达。3.LeY抗体(BG8)封闭乳腺癌细胞后抑制了EGFR的激活。4.通过免疫共沉淀结果分析发现乳腺癌细胞的EGFR上有LeY寡糖链的存在并且在药物作用后表达量减少。上述结果表明人参皂苷Rg3抗肿瘤作用的可能机制之一是通过减少EGFR上LeY寡糖链合成,使EGFR与其配体的结合力下降,干扰配体介导的EGFR激活,从而阻断下游信号传导路径,而抑制了肿瘤细胞的过度增殖。这为探讨人参皂甙Rg3对信号传导途径及关键靶向分子的调控提供了实验依据,并将为深入探讨研究Rg3抗肿瘤作用分子机制开辟新思路。